电子显微镜应用与诊断精析.pptVIP

电镜的起始 电子显微镜诞生于30年代初,但直到60年代以 前,电子显微镜在生物医学中的应用主要限于细 胞生物学、微生物、实验病理学等研究领域。 60年代初期人们开始将电子显微镜应用于人体 病理标本,通过对这些人体病理标本的超微结构 分析,人们进一步了解了疾病的病理变化及其发 生机制,也同时认识到电镜做为一个新的诊断工 具可直接为临床服务,为某些疾病的诊断提供重 要的形态依据。 60年代、70年代是国际上诊断电镜发展 的黄金时代越来越多的疾病通过电镜检 查而得到确诊越来越多的病理学家认 到了电镜诊断的价值,电镜逐渐成为病理 诊断的一个基本工具,欧美国家中几乎所 有大的医疗中心及医院都将电子显微镜 用于疾病的研究和诊断。 电子显微镜在肾活检诊断、疑难肿瘤的 病理诊断、感染性疾病(病毒性,细菌性。 等)、代谢性疾病(贮积性疾病)、细胞外 物质沉积性疾病(如淀粉样变性)、组织细 胞增生症(郎格罕细胞增生性疾病)、纤毛 运动不能综合征等特殊疾病的诊断中公 认起着重要的作用。 几种常用电镜技术 1.1常规电镜技术标本经固定后用m icro slicer 以增加样品量,取其中一部 分(其余切片继续保存)做快速常规包埋、定位 透射电镜观察,整个过程2~3 d。有些特殊结构在器官组织中分布很少,而对 疾病诊断又很有 薄切 光镜下先找到这些特殊结构(必要时 可用美蓝染色),然后再做原位包埋、超薄 观察。虽然将光镜和电镜的 结合起来分析 技术难度,但可使疾病的 电镜病理诊断结果更全面、可靠。 1.2电镜酶细胞化学技术 有些疾病在光镜和常规电镜的基础上 还不能完全确诊,需结合电镜酶细胞化学 技术才能明确诊断。经过筛选,常用于疾 病诊断和鉴别诊断的酶主要有以下几种 1 (1)酸性磷酸酶,主要定位于溶酶体及 是两者的标志酶; (2)葡萄糖262磷酸酶,定位于内质网友樣 两者的标志酶 (3)琥珀酸脱氢酶,定位于线粒体内膜,是其标志 酶 (4)髓过氧化物酶,定位于粒细胞和单核细胞的线 粒体、核膜、高尔基体及胞质颗粒,在原始细胞 阶段的白血病可依靠该酶来进行细胞分型和鉴别 诊断 (5)血小板过氧化物酶,定位于巨核细胞的核膜 线粒体及致密管道系统,对巨核细胞性白血病的 诊断有重要作用。 1.3免疫电镜技术 主要有两种:一种是免疫凝集电镜技术 般是抗原、抗体凝集经负染后在电镜 下观察,多用于诊断病毒性感染疾病。 另一种是免疫电镜定位技术,是用标记物 标记后定位,常用标记物有3种[2] 1)辣根过氧化物酶,相对分子质 标记后可用光镜及电镜观察,多用 标记 (2)胶体金颗粒,可根据需要制备成不同大 小(常用直径为5、10、15nm),能用 细胞内及细胞表面标记 (3)铁蛋白颗粒,相对分子质量较大,一般 用于细胞表面标记,但不如胶金标记优越 现使用较少。根据标本来源、种类和疾病 诊断的需要可做包埋前和包埋后标记,也可 进行单标、双标或多标 1.4扫描电镜技术 可观察到组织及细胞表面结构,适用于较大范 围内观察病变细胞表面结构,在白血病细胞分 类中起重要作用。如毛细胞性白血病,除了在 细胞内找到典型的板层体外,另一个特征是细 胞表面有大量多而长的微绒毛突化可以分析和 判断对疾病的治疗情况。 另外遗传性口形细胞增多症可利用扫描电镜分 型,为临床治疗提供依据。 免疫组织化学技术与电镜的 较 进入80年代后,免疫组织化学技术开始引 入病理诊断 此项技术的不断 特异性及敏感性逐渐得到改善,操作技术 不断地简化并规范 单克隆技术 的发展使得大 临床应 此这项技术很快便在人 种疾病,尤其在肿瘤的诊断中广泛开展起 来,直至今日方兴未艾。