电镜细胞学技术.pptVIP

飞电镜细胞化学技术 账八 电镜细胞化学技术 从光镜组织化学的基础上发展起来, 任务是研究细胞内各种成分在超微结构 水平上分布情况以及这些化学成分在细 胞活动过程中的动态变化。酶的细胞化 学,免疫细胞化学,放射自显影以及各 种细胞组成的生化分析等都属于电镜细 胞化学的范围。 酶细胞化学的发展情况 ◆酶细胞化学是从50年代末开始发展。 ◆酶在生命活动中占有极其重要的地位, Y离开了酶,二切生命活动所需的物质代 谢将成为不可能。 目前已知有200多种酶 LM组织化学方法-显示出酶100多种 EM细胞化学显示出酶80多种 南医大电镜室-M-显示出酶30多种 酶细胞化学的意义 ◆酶的细胞化学定位对研究细胞的生理功 能和病理过程有重要意义 ◆很多酶可以作为细胞膜和各种细胞器的 标志酶,而且有些细胞还有其特有的标 八志酶,这就为研究细胞器的结构与功能, 细胞器的相互关系以及细胞的鉴别提供 了一种新的武器。 细胞器和它们的标志酶 细胞器 标志酶 内质网 核苷二磷酸酶,葡萄糖-6-磷酸 TPP(硫胺素焦磷酸酶), 高尔基体 NADP烟酰胺腺嘌呤二核苷磷 酸酶) GERL和溶酶体 ACP酶(酸性磷酸酶) 线粒体 细胞色素氧化酶,琥珀酸 脱氢酶 微粒体 过氧化氢酶(H2O2) 社、核糖核苷酸酶(如ATP 酶),碱性磷酸酶 酶细胞化学的基本原理 在生物化学中,按照催化反应的性 质将酶分成水解酶、氧化还原酶、转换 A酶、裂合酶、合成酶和异构酶六大类。 但在细胞化学上可以检出的酶多数属水 A测解酶和氧化还原酶两大类。 水解酶 酶十条件 捕捉剂 底物 初级反应产物最终反应产物↓ 捕捉剂通常是重金属(如铅、钡、铜等) XY二般来说,这些最终产物在细胞内的位置代 表酶促反应的位置,也就是酶的定位。 3人以酸性磷酸酶为例: 酸性 磷酸酶 Pb2+ B一甘油磷酸钠 PH5.0 →ROH+H3PO4→·Pb3PO4)2 氧化还原酶 ◆包括氧化酶和脱氢酶,在氧化还原酶细 胞化学方法中,包含着两个既分开又紧 Y密联系的底物,在细胞化学中一个底物 被还原,另一个被氧化。两个底物中 人有一个是酶的理想底物,另一个是专门 选择的在氧化还原时会起重要化学变化 的某种物质,后一种底物有很多方面可 看作是捕捉剂的等效物,称捕捉底物 氧化酶 H2O21氧化酶 DAB氧化聚合物 DAB HO OsO4(锇酸) 锇黑(高电子密度) 脱氢酶 以琥珀酸脱氢酶为例 Y琥珀酸盐1琥珀酸高铁氟化物eCN 入延胡索酸盐脱氢酶,亚铁氰化物eCN C 亚铁氰化铜 注:Cu2+存在在柠檬酸钠或酒石酸钾钠条件下