实验室样本处理及方法 .pptVIP

* 实验室样本处理 定义 实验室样本处理 标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。 生物样本库 政策法规 技术标准 伦理规范 ISO标准 实验室安全 临床实验室 伦理 运输 标准操作规范（SOPs） 质量控制标准 样本采集 样本处理 样本质量检验 样本储存 样本运输 DNA质量鉴定、RNA质量鉴定、蛋白质质量鉴定 知情同意书 质量审查 样本运输 样本转移协议 伦理委员会 伦理审查 赫尔辛基宣言 涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南 关于DNA序列申请专利的声明：专利 关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明 关于DNA取样的声明：控制与获取 世界人类基因组与人权宣言 涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行） 人类基因治疗申报临床试验指导原则 关于利益共享的声明 关于基因治疗的声明 关于人类基因组数据库的声明 国际涉及人类的生物医学研究伦理准则 人类遗传数据国际宣言纲要 人体生物医学研究国际伦理指南 伦理 物流术语 液氮生物容器 中国民用航空危险品运输管理规定 危险物品航空安全运输技术细则 运输 所有从业人员应取得《岗前培训考核合格证》 生物样本库工作流程 标本采集 标本处理 入库登记 标本储存 质控 Yes No 销毁 《废弃物处置操作程序》 抽检 No Yes 标本使用 使用申请 标本发放 剩余标本回收 数据库 标本采集 生物标本采集和储存 研究成功的关键 要求 根据所采样本的类型和所分析的物质而定 在采集和储存过程中不能受到“污染” 储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果 所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识 标本采集 举例 标本采集 尿液标本的保存-最好不超过2h 尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。 尿液保存常用方法有两种： 1.冷藏法：4℃条件下不超过8h 可抑制微生物生长，维持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣检查。 标本采集 尿液标本的保存-最好不超过2h 尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。 尿液保存常用方法有两种： 2.化学防腐法： ①甲苯：（一般用量为1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止细菌污染，通常用于尿酮体、尿糖，尿蛋白质等测定 ②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中细胞与管型的测定； ③麝香草酚：用10%的麝香草酚异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙等测定 ④浓盐酸：每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可，使尿液维持在pH 2.0左右。主要可用于17-羟皮质类因醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、VMA等定量测定等。 标本采集 标本采集 标本运送 血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否存在干扰血凝块。 标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动 尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析，必须加防腐剂或冷藏不超过8小时 细菌检查标本应采用消毒容器，防止细菌污染，室温条件不超过2小时或4℃冷藏保存。 标本运送 标本处理和保存 标本采集后应及时处理、分装后保存 血液标本处理操作规程 DNA提取和纯化操作规程：血液、粪便、棉拭子、唾液 RNA提取和纯化操作规程：血液、棉拭子 蛋白质提取和保存操作规程 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全血、血清、血浆、干血片、血凝块、白细胞 血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆 血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。 全血：由液态血浆和血细胞组成 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全血标本的保存 生化检验：尽可能在2小时内检验或分离血清/血浆，不能及时分离或检验时，应4℃低温冷藏，不能超过24小时。操作时动作应轻柔，避免剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。 DNA检测： 4℃保