相差显微镜和泽泽尔尼克.pptVIP

相差显微镜与泽 尔尼克 1953年诺贝尔物理 学奖 052974夏方莹  相差显微镜 位相差显微镜( phase contrast microscope) 种将光线通过透明标本细节时所产生的 光程差(即相位差)转化为光强差的特种 显微镜。 1942年制造了第一台相差显微镜,由于此 项发明,泽尔尼克于1953年获诺贝尔奖  泽尔尼克( Frits Frederik zernike, 1888-1966) 1888年7月16日出生于荷兰阿姆斯特丹 个数学教师的家庭里。他父母都是数 学教师。 因论证相衬法,特别是发明相衬显微 镜,获得了1953年度诺贝尔物理学奖。  原理 令人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度), 对于无色通明的生物标本,未经染色的标本(如活 的细胞),其形态和内部结构往往难以分辨 令显微镜中所观察的许多物体,如生物切片、油膜和 位相光栅等,均具有较高的透明度。光波通过这些 物体时,只改变入射光波的位相而不改变它的振幅 这种物体称为“位相物体” 低么办?  相衬法(相差法) 今由于细胞各部分的折射率和厚度的不同,光 线通过这种标本时,直射光和衍射光的光程 就会有差别。随着光程的增加或减少,加快 或落后的光波的相位会发生改变(产生相位 差 令位相(相位):任一时刻光的振动状态,(振幅相 同的光不同时刻振动状态不同,光是余弦函数变化 的) 令光程:光在媒质中通过的路程和该媒质折射率的乘 积。将光在介质中传播的路程折合为光在真空中传 播的相应路程。  令光的相位差人的肉眼感觉不到,但相差显微 镜能通过其特殊装置——环状光阑和相板, 利用光的干涉现象,将光的相位差转变为人 眼可以察觉的振幅差(明暗差),从而使原 来透明的物体表现出明显的明暗差异,对比 度增强,使我们能比较清楚的观察到普通光 学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不 清的活细胞及细胞内的某些细微结构。  构造(特殊光学装置) a.环状光阑( Ring slit/ annular diaphragm) 位于光源与聚光器之间 作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥,焦聚到标 本上 装在聚光镜的下方,而与聚光镜组合为一体--相衬聚 光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内, 外面标有10X、20X、40X、100X等字样,与相对 应倍数的物镜配合使用。  构造 b.相板( Phase plate): 装在物镜的后焦平面处 两部分: 1共轭面:半透明的环状 未发生偏斜的直射光通过 将直射光推迟一定波长,两组光波合轴后光波相加,振幅加大, 标本结构比周围介质更加变亮,形成亮反差 2补偿面: 通过衍射光的部分 将衍射光推迟一定波长,两组光线合轴后光波相减,振幅变小 形成暗反差(或称正反差),结构比周围介质更加变暗 有相板的物镜称”相衬物镜”,外壳上常有”Ph字样。  令C.合轴调节望远镜: 使环状光阑的像与相板共轭面完全吻合,实现对直射光和衍射 光的特殊处理。否则应被吸收的直射光被泄掉,而不该吸收 的衍射光反被吸收,应推迟的相位有的不能被推迟,这样就 不能达到相差镜检的效果。 由于环状光阑是通过转盘聚光器与物镜相匹配的,因而环状光 阑与相板常不同轴。为此,相差显微镜配备有 合轴调节 望远镜(在镜的外壳上标有“CT符号),用于合轴调节。 D绿色滤光片由于使用的照明光线的波长不同,常引起相 位的变化,为了获得良好的相差效果,相差显微镜要求使用 波长范围比较窄的单色光,通常是用绿色滤光片来调整光源 的波长。  示意图 Specimen:样本 Phase Contrast Light Pathways Objective:物镜 Condenser:聚光镜 Phase Deflected light: 相板( Phase ring) 环形光阑( annular phaseplate) objective Specimen Condenser Annular Light Figure 1