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实验二十一 旋毛虫病肉品检验技术 旋毛虫病是重要的人畜共患寄生虫病，它是由毛形科的旋毛形线虫 （Trichinellaspiralis）成虫寄生 于肠管，幼虫寄生于横纹肌所引起的。该病流行于哺乳类动物间，鸟类可实验感染。人若摄食了生的或 未煮熟的含旋毛虫包囊的猪肉可感染生病，主要临床表现为胃肠道症状、发热、肌痛、水肿和血液嗜酸 性粒细胞增多等，严重者可以导致死亡，故肉品卫生检验中将旋毛虫列为首要项目。旋毛虫病的肉品检 验是生猪屠宰检疫中的一项重要内容，通过该项检验可以检出感染旋毛虫的猪只。对于杜绝病猪肉流入 肉品市场，有着重要的作用。 一、实验目的及要求 1．掌握肌肉旋毛虫压片镜检法、消化法的操作方法。 2 ．了解酶联免疫吸附试验的方法。 3 ．掌握旋毛虫病肉的处理方法。 二、实验器材 （一）旋毛虫压片镜检法 1．材料：被检肉品。 2 ．器材：载玻片，剪刀，镊子，天平，显微镜。 3 ．试剂：50%甘油水溶液，10%稀盐酸。 （二）旋毛虫集样消化法 1．材料：被检肉品。 2 ．器材：组织捣碎机，采样盘，磁力加热搅拌器，圆盘转动式计数镜检台，集虫器，载玻片，表 面皿，烧杯，剪刀，镊子，天平，温度计，显微镜。 3 ．试剂：0.04% 胃蛋白酶溶液，盐酸。 （三）旋毛虫酶联免疫吸附试验 （ELISA） 1．材料：被检肉品。 2 ．器材：滤纸片，玻璃瓶，剪刀，酶标测定仪，反应板，加样器。 3 ．试剂： （1）阳性血清，阴性血清； （2 ）旋毛虫抗原； （3 ）酶标抗体 （又称酶结合物、酶标记免疫球蛋白）； （4 ）包被液：Na CO 1.59g、NaN 0.2g、NaHCO 2.93g ，用蒸馏水加至1000ml ，调整pH 为9.6 。 2 3 3 3 放4 ℃冰箱中保存备用。 （5 ）洗涤液：NaCl 8.9g、Tween-20 0.5g、KH PO 0.2g 、NaN 0.2g 、Na HPO ·12H O 2.9g、KCl 0.2g ， 2 4 3 2 4 2 用蒸馏水加至1000ml ，调整pH 为7.4 。 （6 ）底物溶液 （OPD-H O ）：称取邻苯二胺40mg ，溶解于100ml pH5.0 磷酸-柠檬酸缓冲液 （0.1M 2 2 柠檬酸24.3m 1，加0.2M NaH PO 25.7ml ，加水50ml ）中，然后加30 ％过氧化氢0.15ml，现配现用。 2 4 （7 ）终止液 （2M H SO ）：浓硫酸22.2ml ，蒸馏水177.8ml 。 2 4 三、实验方法、步骤和操作要领 （一）旋毛虫压片镜检法 1．采样。自胴体左右两侧横膈膜的膈肌脚 （见图2 1-1），各采膈肌 1 块 （与胴体编成相同号码）， 每块肉样不少于20g，记为一份肉样，送至检验台检查。如果被检样品为部分胴体，则可从肋间肌、腰 肌、咬肌等处采样。 2 ．肉眼检查。撕去被检样品肌膜，将肌肉拉平，在良好的光线下仔细检查表面有无可疑的旋毛虫 病灶 （见图2 1-2 ）。未钙化的包囊呈露滴状，半透明，细针尖大小，较肌肉的色泽淡；随着包囊形成时 间的增加，色泽逐步变深而为乳白色、灰白色或黄白色。若见可疑病灶时，做好记录且告知总检将可疑 肉尸隔离，待压片镜检后做出处理决定。 图21-1 取左右膈肌脚样品 图21-2 撕开肌膜肉眼观察 3 ．制片。取清洁载玻片1 块放于检验台上，并尽量靠近检验者。用镊子夹住肉样顺着肌纤维方向 将可疑部分剪下。如果无可疑病灶的，则顺着肌纤维方向在肉块的不同部位剪取12 个麦粒大小的肉粒 （2 块肉样共剪取24 个小肉粒）。将剪下的肉粒依次均匀地附贴于载玻片上且排成两行，每行6 粒。然 后，再取一清洁载玻片盖放在肉片的载玻片上，并用力适度捏住两端轻轻加压，把肉粒压成很薄的薄片， 以能通过肉片标本看清下面报纸上的小字为标准。另一块膈肌按上法制作，两片压片标本为一组进行镜