PXMP4在结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用研究.pdfVIP

目 录 摘 要 1 Abstract 3 前 言 6 第一部分 从组织和细胞水平检测 PXMP4 的表达 8 1 材料与方法 8 2 结果 22 第二部分 PXMP4 对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响 28 1 材料与方法 28 2 结果 34 讨 论 46 结 论 51 参考文献 52 综述：PXMP4 基因的研究进展 56 附 录 68 攻读学位期间发表文章情况 69 致 谢 70 个人简历 71 PXMP4 在结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用研究 摘 要 背景 结直肠癌是世界第三高发恶性肿瘤，其中肿瘤转移是导致患者死亡的主要原因。 肿瘤发生是一个多步骤、多阶段、多基因的复杂过程。近年研究发现 PXMP4 参与前 列腺癌的发生，但是 PXMP4 在结直肠癌中的功能未知。课题组通过生物信息学发现 PXMP4 是结直肠癌组织和正常结直肠粘膜组织中的差异表达基因。拟利用基因转染、 体外增殖、体外侵袭、迁移实验研究：检测 PXMP4 在结直肠癌增殖、侵袭和迁移中 的作用，为结直肠癌的诊治提供新靶点。 目的 以LOVO 、RKO 、SW620、SW480、HCT116 和 DLD1 六株结直肠癌为研究对象， 分析 PXMP4 的表达情况，并通过细胞功能实验研究 PXMP4 对结直肠癌细胞增殖、 侵袭和迁移能力的影响。 方法 1. 通过（gene expression omnibus ，GEO)数据库等生物信息学方法分析 PXMP4 在配对的结直肠癌和正常组织中的表达情况。 2. 利用免疫组织化学（immunohistochemistry ，IHC ）检测结直肠癌石蜡样本中 PXMP4 的表达，并分析 PXMP4 的表达与肿瘤大小、分化、淋巴结转移等相关临床 病理参数的关系。 3. 利用 qRT-PCR 和western blot 方法检测PXMP4 mRNA 和蛋白在六株结直肠癌 细胞中的表达。 4. 构建过表达和干扰 PXMP4 的结直肠癌细胞株并用qRT-PCR 和 western blot 实 验验证 PXMP4 表达。 5. 利用 Transwell、CCK-8 和划痕实验检测 PXMP4 对结直肠癌细胞株增殖、侵 袭、迁移能力的影响。 1 结果 1. GEO 基因表达数据库显示 PXMP4 是结直肠癌组织和正常组织中的一个差异 表达基因。 2. IHC 结果表明：PXMP4 主要定位于细胞器膜，呈棕黄色；在 112 例结直肠癌 患者组织蜡块中，80 例结直肠癌组织中 PXMP4 的表达高于其配对的正常黏膜组织； PXMP4 的表达与患者的年龄、性别及肿瘤大小没有差异（P0.05 ），而与分化程度 和淋巴结转移密切相关，差异具有统计学意义（P0.05 ）。 3. qRT-PCR 和 western blot 结果表明，6 株结直肠癌细胞中 PXMP4 的表达差异 显著（P0.05 ），其中HCT116 和 SW620 高表达，RKO 和 SW480 低表达。 4. CCK-8 实验结果表明，过表达组细胞的生长速度明显快于空载组（P0.05 ）； 干扰组细胞的生长速度显著慢于对照组（P0.05 ）。 5.Transwell 侵袭实验结果表明，过表达组穿过小室的细胞数量显著多于对照组 （P0.05 ）；而干扰组穿过小室的细胞数量显著少于对照组（P0.05 ）。 6.划痕实验结果表明，过表达组的迁移速