巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒的研制.pdf

巨细胞病毒 IgG 抗体检测试剂盒的研制 摘 要 人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus ），其英文缩写为“HCMV ”，它属于疱疹 病毒科 β 属的一种，DNA 病毒，具有双螺旋结构。巨细胞病毒主要通过接触、输血、 宫内、产道等感染，胎儿、新生儿、幼儿、孕妇、免疫缺陷症患者等易感染HCMV ，孕 妇感染可导致新生儿产生严重的影响，如先天性畸形。免疫功能不全或免疫系统处于抑 制状态的机体，非常容易受 HCMV 感染，例如器官移植后接受免疫抑制治疗病人、恶 性肿瘤化疗后病人、艾滋病患者等，以上病人如果感染 HCMV 后，会产生非常严重的 疾病或具有很高的死亡率。 本研究对试剂盒的抗原选择、抗原包被、封闭、二抗的选择、显色液的选择、酶标 板的选择、加样的选择、孵育时间的确定等做了研究，利用间接法，研制了巨细胞病毒 IgG 抗体检测试剂盒，成功生产了三批巨细胞病毒 IgG 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）。 本研究对连续生产批批批试剂盒阴性符合率（N1-N5 ）、 阳性符合率 （P1-P10 ）、重复性 （R ）、批间差 （CV ）、检测限（L1-L3 ）、分析特异 性 （交叉干扰实验）等技术指标进行了研究。同时，采用 1050 例样本，与以上市的产 品进行了比对试验研究，实验结果进行 Kappa 、X2 检验和相关性分析。此外，对试剂盒 的稳定性进行了研究，包括 0-15 个月的实时稳定性、0-4 周 37℃高温加速破坏稳定性、 0-28 天的开瓶稳定性、高温地区和低温地区的运输稳定性及试剂盒各组分反复冻融 5 次 的稳定性，并根据其准确性、特异性、重复性、检测限等实验结果对试剂盒的稳定性进 行了综合评价。 批批批试剂盒阴性符合率、阳性符合率、检测限、 重复性、分析特异性等均达到要求；三批试剂盒送往中国食品药品检定研究院检定，检 验结果显示全部合格；相关的交叉、干扰实验对试剂盒的检测结果没有影响，全部通过； 比对试验敏感度为98.92%，特异性为 98.60% ；与已上市试剂盒的总符合率为 98.83%， 有较好的相关性（y=0.8816x+0.1503 ，R2=0.9130 ）；Youden 指数为 0.9752，Kappa 系 2 数为 0.9710，有高度的一致性，X =0.039 （P0.05 ）；试剂盒的实时稳定性、高温加速 破坏稳定性、开瓶稳定性、运输稳定性、反复冻融稳定性均符合相关规定。 巨细胞病毒 IgG 抗体检测试剂盒 （酶联免疫法）研制成功，已经中试生产了三批， I 巨细胞病毒 IgG 抗体检测试剂盒的研制 正在进行注册申报，可以用于临床疾病的诊断和预后评估。 关键词：巨细胞病毒；酶联免疫法；性能验证；稳定性；定性 II The research and development of the ELISA kit of IgG antibody to human cytomegalovirus Abstract Human cytomegalovirus (HCMV), also known as cell inclusion body virus, is a double helix DNA virus belonging to the family of herpesvirus. It is called cytomegalovirus ,because the infected cells are swollen and have a hμge nuclear inclusion body. HCMV infection mainly occurs throμgh contact, blood tr