机械拉伸加载对BMSCs侵袭行为的影响及相关分子机理研究.pdfVIP

重庆大学硕士学位论文 中文摘要 摘 要 骨髓间充质干细胞 （Bone ‐marrow ‐derived mesenchymal stem cells, BMSCs ） 在损伤组织的愈合和再生医学中发挥着重要作用。然而，BMSCs 发挥其修复功能 的前提是必须从其原来的微环境转移到损伤组织位点，这个过程非常复杂，受到 机械因素和化学因素的影响。目前，相关研究显示BMSCs 的增殖、分化、迁移均 受到机械力刺激的影响。我们之前的研究表明循环机械拉伸加载能够促进BMSCs 的迁移，抑制细胞的侵袭，但其中的分子机制，尤其是抑制细胞侵袭能力的分子 机制并不清楚。本文基于此，继续深入探究机械拉伸加载影响BMSCs 侵袭能力的 分子机制。MT1-MMP 是 MMPs 家族成员，其主要功能是降解胞外基质 （Extracellular matrix, ECM ），为细胞侵袭到其他组织开辟道路。PI3K/Akt 信号通 路参与介导MMPs 的表达和活性，在细胞侵袭过程中发挥重要作用。因此，本实 验首先取用 SD 大鼠后肢的股骨和胫骨分离提取原代BMSCs ，培养原代细胞，待 细胞长满后，传代培养细胞；其次利用机械拉伸加载装置拉伸加载BMSCs ，并采 用Transwell 装置 （小室内铺一层基质胶）以检测细胞侵袭能力的变化；实验进一 步检测了机械拉伸加载对MT1-MMP 的影响以及过表达MT1-MMP 对BMSCs 侵 袭能力的影响；最后考察了机械拉伸加载对 PI3K/Akt 信号通路活性的影响以及 PI3K/Akt 信号通路对机械拉伸加载条件下MT1-MMP 的表达以及BMSCs 侵袭能 力的影响。 结果显示机械拉伸加载显著降低 BMSCs 的侵袭能力，同时下调 MT1-MMP 的表达水平。通过过表达MT1-MMP ，发现BMSCs 侵袭能力显著增加，同时，过 表达MT1 ‐MMP 可恢复机械拉伸加载降低的BMSCs 的侵袭能力，提示BMSCs 的侵袭能力受到MT1-MMP 的调控。此外，机械拉伸加载抑制PI3K/Akt 信号通路 的活性。因此，实验进一步研究了PI3K/Akt 信号通路与MT1-MMP 的表达水平以 及BMSCs 侵袭能力之间的关系，发现在PI3K 磷酸化抑制剂LY294002 作用下， Akt 的磷酸化水平、MT1-MMP 表达水平和BMSCs 的侵袭能力均显著下降。采用 Akt 磷酸化抑制剂A-443654 作用BMSCs ，也得到相似的实验结果。采用Akt 磷酸 化激活剂SC79 上调Akt 磷酸化可增加MT1 ‐MMP 表达，抑制机械拉伸加载降低 BMSCs 侵袭能力。 本研究工作证明了机械拉伸加载通过PI3K/Akt 信号通路下调MT1 ‐MMP 表 达进而抑制BMSCs 的侵袭能力。该研究结果为深入认识力学调控BMSCs 的运动 能力及其力信号转导机制提供了实验依据。 I 重庆大学硕士学位论文 中文摘要 关键词：骨髓间充质干细胞 （BMSCs ）；机械拉伸；MT1-MMP ；侵袭；PI3K/Akt II 重庆大学硕士学位论文 英文摘要 ABSTRACT Bone ‐marrow ‐derived mesenchymal stem cells (BMSCs) are pluripotent stem cells with self-renewal and differentiation ability, which play an important role in healing of dam