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R D —α;生命科学学院生物化学;生命科学学院生物化学;生命科学学院生物化学 两边取负对数得 2×—lg[H+]＝—lg K1＋—lgK2 即： pH=[ pK1 + pK2] / 2 = pI 分子的存在状态是多种多样的，但在一定条件下以某一状态为主。 即 aa 的等电点pI 就是两性离子(R0)两侧的 pK 值的平均值。基团的 pK 值可查得， 故 pI 值可由二 pK 值计算得之。 对于有三个解离基团的 aa，如 Asp、Lys 只要取其兼(两)性离子两侧的 pK 值 的平均值即得 pI 值。 COOH COO— COO— CH — NH+3 K1 CH — NH+3 K2 CH — NH+3 K3 Asp=;生命科学学院生??化学;生命科学学院生物化学;荧光产物;+;生命科学学院生物化学 磺酸的肽段因负电荷增加而偏离对角线。用茚三酮显色，分离，测序，与多肽链 比较，即可确定二硫键位置。 ;生命科学学院生物化学 键）。带同电荷的 aa 出现在邻近位置上就会影响螺旋的形成，甘氨酸也不易形成 螺旋。 2） β—折叠结构： O=C C N C 纵向排列形成片层 N-H;生命科学学院生物化学 布在分子表面与水结合，所以具水溶性。有几个结构域常常就有几个功能区，结 构与功能的统一。 两条以上肽链才有四级结构：分子量大的蛋白多由几条多肽链组成，它们以 非共价键结合成一个功能单位，执行一个特定功能，其中一条肽链就称为该蛋白 的一个亚基（Subunit）如血红蛋白由 2α、2β亚基组成。 β1 β2 以共价键连接的肽链不能称为亚基，如胰岛素 A、B 链以两个—S—S—键相 连。 四级结构：就是指亚基之间的连接及空间排列，不包括亚基内部得空间结构， 亚基单独存在无活性或活性很低，只有聚合成四级结构，才能有完整的生物活性。 如血红蛋白只有 2α、2β（141、146aa）=574 个 aa 一起才能组成完整的功能单 位。 胶原蛋白：左手螺旋的多肽链缠绕成三股右手超螺旋的原胶原蛋白分子。 胶原蛋白。 ;生命科学学院生物化学 ㈡ 构象与功能的关系 构象：即空间结构。指取代基团，因为单键旋转所形成的不同立体结构。 别构现象：构象改变功能也随之改变的现象。 血红蛋白与 O2 的亲和力是很弱的，但其一个亚基与 O2 结合后引起的构象改 变，亚基间次级键破坏，使其它亚基与 O2 结合力变大，结合速度变快。氧结合曲 线成 S 型 β1 β2;生命科学学院生物化学;生命科学学院生物化学 物理变性因素：超声波、紫外线、加热、震荡与搅拌。 变性的本质：次级结构破坏，但一级结构没破坏，所以分子量和组成不变。 可逆或不可逆，胃蛋白酶的升温(80-90℃)与降温(37℃)可使活性可逆变化。 应用：制作豆腐、尿蛋白检验(加热)、急救重金属中毒病人(给中毒病人吃 大量乳品、浓豆浆或蛋清，然后催吐)等。制备蛋白与酶应防变性：应用低温等。 六、蛋白质的颜色反应（分析测定的依据） 1. 双缩脲反应（要求含两个以上肽键） 在碱性条件下能与 CuSO4 反应生成红紫色的络合物，具有双缩脲结构的物质 都有此反应（二脲加热脱氨形成双缩脲：H N—C—NH—C—NH ）与 Cu ++形成络合 2 2; ;胞嘧;生命科学学院生物化学;生命科学学院生物化学 简化式的读写：左 5′ 右 3′(中间以 3′，5′—磷酸二酯键连接，如果不 是应注明)。也是合成的方向！ 第三节 DNA 的结构 一、 一级结构：DNA 分子中四种脱氧核苷酸的排列顺序。 生物大分子，分子一般在 5000b 以上。 二、 二级结构：双螺旋结构 Watson Crick 1953 提出。;生命科学学院生物化学;第 页 共20 132 页;生命科学学院生物化学 解链环形：复制、转录时的状态 负超螺旋：自然状态；复制转录时可形成正超螺旋 真核生物线形 DNA：绕组蛋白形成核小体（也是一种超螺旋） ;页;生命科学学院生物化学 tRNA 三 叶 草 叶 型 : 3? 5? ;生命科学学院生物化学;生命科学学院生物化学 （7—甲基 G）、3′加尾 polyA（100-200），成为成熟的 mRNA. 四、snRNA、asRNA snRNA：核内小 RNA（胞质中称 scRNA），58-300b 5＇端有帽（N2，N2，7－ 三甲基鸟苷），内含 U 多的 U—RNA：U1、U2（电泳呈不同的带）；无帽的按沉降 系数排号 4.5s 7sRNA 等。控制细胞分裂与分化，物质运输等。参与 mRNA 的剪 接及蛋白质合成的调节。 在哺乳动物细胞核内，至少发现