(最新完整版)高中生物高考题分类题基因工程.docVIP

知识点一 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望， 进行严格的设计， 并通过体外 DNA 重组和转基因等技 术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由 于基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做 DNA 重组技术。 注意：对本概念应从以下几个方面理解： 知识点二 基因工程的基本工具 1.限制性核酸内切酶 ——“ 分子手术刀 ” (1)限制性内切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 (2)限制性内切酶的作用：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并能将 每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。 (3)限制性内切酶的切割方式及结果：①在中心轴线两侧将  DNA 切开，切口是黏性末 端。②沿着中心轴线切开 DNA ，切口是平末端。 2.DNA 连接酶 ——“ 分子缝合针 ” (1)来源：大肠杆菌、 T 4 噬菌体 (2)DNA 连接酶的种类： E.coliDNA 连接酶和 T 4DNA 连接酶。 (3)作用及作用部位： E.coliDNA 连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键，  T 4DNA 连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。 注意：比较有关的 DNA 酶 (1)DNA 水解酶：能够将 DNA 水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成磷酸、脱氧核糖和 含氮碱基 (2)DNA 解旋酶：能够将 DNA 或 DNA 的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和 碱基之间的氢键。注意：使 DNA 解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温 ( 如 94℃ )、重金属盐的作用下，也可使 DNA 解旋。 (3)DNA 聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷 酸二酯键连接成 DNA 长链。 (4)DNA 连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链  DNA 的缺口。注意比较  DNA 聚合酶和 DNA 连接酶的异同点。 3.基因进入受体细胞的载体  ——“ 分子运输车 ” (1)分子运载车的种类：①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小 的环状的裸露的 DNA 分子，独立于拟核之外。②病毒：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒 等。 (2)运载体作用：①是用它做运载工具，将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它 在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 (3)作为运载体必须具备的条件： ①在宿主细胞中保存下来并大量复制 ②有多个限制性 内切酶切点 ③有一定的标记基因，便于筛选。 教材拓展： 拓展点一 限制酶所识别序列的特点 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱 基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排 列的。如： 以中心线为轴，两侧碱基互补对称 ; 为轴，两侧碱基互补对称。 拓展点二 DNA 连接酶连接的是什么部位 ? DNA 连接酶是将一段 DNA 片段 3′端的羟基与另一 DNA 片段 5′端磷酸基团上的羟基连 接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。 【基因工程的基本操作程序】 教材梳理： 基因工程的基本操作步骤为四步曲： 目的基因的获取 ;基因表达载体的构建 ;将目的基因 导入受体细胞 ; 目的基因的检测与鉴定。一.目的基因的获取 1.目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。 2.目的基因的获取方法： 注:需要重点复习的内容有： a 基因组文库与部分基因文库的含义及区别；建立基因文 库的目的； 如何从基因文库中获取目的基因； b 逆转录法的过程 ，c PCR 技术 ( 原理、场所、 条件、过程、特点 )DNA 复制与 PCR 技术列表比较。如下所示： (1)从基因文库中获取 基因文库： 将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体储存， 各个 受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 构建基因文库的目的： 为了在不知目的基因序列的情况下，  便于获得所需的目的基因。 基因组文库：含有一种生物的所有基因。 部分基因文库 (如 cDNA 文库 )：含部分基因，可由  mRNA 反转录而来。 (2)利用 PCR 技术扩增目的基因 PCR：是一项在生物体外复制特定  DNA 片段的核酸合成技术。 原理： DNA 双链复制 原料：模板 DNA;RNA 引物 ;四种脱氧核苷酸 ;热稳定 DNA 聚合酶 (Taq 酶 ); 方法： DNA 受热变性解旋为单链、冷却后 RNA 引物与单链相应互补序列结合、 DNA 聚合酶作用下延伸合成互补链。 过程：热变性 (90-95 ℃ )、退火 (55-60