实验肉制品中亚硝酸盐的测定.pdf

实验 ?? 肉制品中亚硝酸盐的测定 （盐酸萘乙二胺法） ??? 一、目的与要求： 1. 熟练掌握样品制备、提取的基本操作技能。 2. 明确与掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的基本原理及操作方法 。 ??? 二、原理： 样品经沉淀蛋白质， 除去脂肪后， 在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后， 生 成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二氨偶合形成紫红色染料，此 “染料”颜色的深浅与亚硝酸 盐的含量成正比，其最大吸收波长为 538nm , 可以测定吸光度并与标准比较定量。反应式如 下：见教材 P316 1． 重氮化反应： 2． 偶合反应： 三、样品、试剂与仪器 样品： 品名： 厂家： 试剂： 1. 蛋白质沉淀剂（公用） （1） 饱和硼砂溶液：称取 5 克硼酸钠 (Na2B07 ·10H20) ，溶于 100 毫升热水中，冷却 后备用。 (2) 亚铁氰化钾溶液：称取 10.6 克亚铁氰化钾 [K 4Fe9 (CN) 5.3H2O] ，溶于水后，稀释至 100 毫升。 乙酸锌溶液：称取 11g Zn(CHCOO) .2H O 加 1.5mL 冰乙酸，溶于水定容 50mL 。 2 2 2. 显色剂 （1）0.4 ％对氨基苯磺酸溶液：称取 0.4 克对氨基苯磺酸，溶于 100 毫升 20 ％的盐酸 中，避光保存。 100ml/4 组 （）0.2 ％盐酸萘乙二胺溶液：称取 0.2 克盐酸萘乙二胺，溶于 100 毫升重蒸馏水中， 避光保存。 100ml/4 组 3. 亚硝酸钠标准原液：精密称取 0.1000 克于硅胶干燥器中干燥 24 小时的亚硝酸钠， 加水溶解移入 500 毫升容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 200 微克亚 硝酸钠。 2 4. 亚硝酸钠标准使用液 (5 μg NaNO/ml) ：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00 毫升， 置于 200 毫升容量瓶中，加重蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 5 μg 亚硝 酸钠。亚硝酸钠标准原液由教师提供。 5. 1：4 盐酸 配制显色剂 1 用，每 4 组 100ml 。 仪器： 1. 小型绞肉机。 2. 721 分光光度计。 3．25ml 比色管 每组 7 支 ?? ? 四、操作方法： 1. 样品处理： 称取 5.0 克经绞碎混匀的样品，置于 50 毫升干洁的小烧杯中，加入 12.5 毫升饱和 硼砂溶液， 以玻璃棒搅拌均匀， 以 70℃左右的重蒸馏水约 300 毫升分数次将样品全部洗 入 500 毫升容量瓶中。（此容量瓶专用） 置沸水浴中加热 15 分钟， 取出后冷至室温， 然后一面转动一面加入 5 毫升亚铁氰化 钾溶液，摇匀，再加入 5 毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加重蒸水至刻度，混匀，放置 0.5