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实验一 薄层板的制备、活度测定及应用 1. 目的要求 1.1 掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 1.2 掌握吸附剂活度测定的原理及方法 1.3 应用薄层层析法检测以中草药化学成分 2．实验原理 2.1 薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也 可用于混合物的分离、 提纯及含量的测定。 还可以通过薄层层析来摸索和确定柱 层析时的洗脱条件。 根据分离的原理不同， 薄层层析可以分为两类： 用吸附剂铺 成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析； 用纤维素粉、 硅胶、硅藻土为支持剂铺 成的薄层， 属于分配薄层层析。 薄层层析中以吸附簿层为多用， 吸附薄层中常用 的吸附剂为氧化销和硅胶。 2.2 吸附簿层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同， 及展开剂对它们 的解吸附能力的小同，使各成分达到分离。吸附作用主要由于物体表面作用力、 氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。吸附强度决定于吸附剂的吸附能力， 还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。 2.3 分配簿层层析的原理是，用极性溶剂吸附在同体支持剂上所形成的混合物， 铺成簿层（或装柱），然后活化、点样（或上样） ，再用极性较弱的展开剂（或洗 脱剂）进行展开。 在展开过程中， 各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分 配。由于各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。 2. 4 由于化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程 度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值 (Rf ) ： 化合物的吸附能力与它们的极性成正比， 具有较大极性的化合物吸附较强， 因此 Rf 值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等） ，化合物移动的距 f 离和展开剂移动的距离之比是一定的，即 R 值是化合物的物理常数，其大小只 与化合物本身的结构有关，因此可以根据 Rf 值鉴别化合物 2.5 薄层层析可适用小量样品 （几到几十微克甚至 0.01 g ）的分离：也可用于多 达 500mg样品的分离， 是近代有机化学中用于定性、 定量的一种重要手段。 特别 适用于那些挥发性小的化合物， 以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱 分析的物质。 3 实验材料 254 ，硅胶（ H ），羧甲基纤维素钠，玻璃片，市售薄层板 3.1 材料：硅胶 GF 3.2 溶剂：石油醚，乙酸乙酯，二乙胺等 4 实验步骤 4.1 硅胶 (H) 羧甲基纤维钠 (CMC-Na)薄层板的制备 取 0.8%羧甲基纤维纳 10ml，倒入烧杯中， 然后逐步加入薄层层析用硅胶 3.3 克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只 有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄 片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干， 100℃下烘 30 分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口 瓶内，以供再用。 4.2 吸附剂的活度测定 一 般 选 用 三 种 染 料 的 薄 层 层 析 法 进 行 测 定 ， 即 用 0.01% 二 甲 基 黄 （Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）。苏丹红（ Sudan Ⅲ），靛酚蓝 （Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline ）的苯溶液各 10 μl 点滴于硅胶 H 薄层上，以苯为展开剂，展开