“王松：基因工程中有关限制酶的高考试题归类解析”.pdf

基因工程中有关限制酶的高考试题归类解析 王松（辽宁省沈阳市同泽高中 110000） 新人教版选修三的内容包括基因工程，细胞工程，胚胎工程，生态工程等内容，大部 分内容都是记忆性的， 在高考中的难度要求比较低， 本人认为在近几年的高考题中难度最大 的就是基因工程中有关限制酶的使用，现归纳如下： 1 1 种限制酶酶切造成的载体与目的基因的自身成环 例 1 （2008 年高考海南卷 26 题） 图为某种质粒表达载体简图， 小箭头所指分别为限制 性内切酶 EcoRI 、BamHI 的酶切位点， ampR 为青霉素抗性基因， tctR 为四环素抗性基因， P 启动子， T 为终止子， ori 为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括 EcoRI 、BamHI 在 内的多种酶的酶切位点。 据图回答： （1）将含有目的基因的 DNA 与质粒该表达载体分别用 EcoRI 酶切，酶切产物用ＤＮＡ 连接酶进行连接后，其中由两个 DNA 片段之间连接形成的产物有 、 、 三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒， 需要对这些连接产物进行 。 （2 ）用上述 3 种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿 主细胞接种到含四环素的培养基中， 能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ； 接种到含青霉素培养基中，能生长的原核宿主细胞所含的连接产物是 ????????? ； ??? （3）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生 任意连接，酶切时应选用的酶是 。 （1）目的基因 — 载体连接物 ， 载体 -- 载体连接物 ， 目的基因 -- 目的基因连接物 ；分离纯化 （2 ）载体 --载体连接物； 目的基因 --载体连接物， 载体 --载体连接物 （3） EcoRI 和 BamHI 解析：本题（ 1）中用一种限制酶 EcoRI 酶切含有目的基因的 DNA 与质粒表达载体， 目的基因以及质粒表达载体带有的切口是相同的，完全可以自身成环，为了避免自身成环， 可以采用两种酶切位点不同的限制酶进行酶切。 例 2 (2010 高考题江苏卷 27 题 ) 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点， 图 l 、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图 1 所示的质粒分子经 Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2 ）若对图中质粒进行改造，插入的 Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源 DNA 构建重组质粒，不能使用 Srna Ⅰ切割，原因是 。 （4 ）与只使用 EcoR I 相比较，使用 BamH Ⅰ和 Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源 DNA 的优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从 cDNA 文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能 力的大肠杆菌突变体， 然后在 的培养基中培养， 以完成目的基因表达的初步检测。 【答案】