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实验二十一、蠕虫病粪便检查法 一、实训目的: 1.掌握粪便采集保存方法的方法。 2.掌握动物蠕虫病常见的实验室粪便虫卵检查操作技术。 3.在光学显微镜下区分虫卵和异物。 4.认识吸虫卵、绦虫卵、线虫卵等蠕虫虫卵,掌握其一般特征。 蠕虫病粪便检查法 蠕虫病粪便检查法 二、实训内容 1.粪便的采集、保存和寄送方法 2.直接涂片法 3.漂浮检查法 4.沉淀检查法 蠕虫病粪便检查法 三、实训条件: 待检新鲜粪便,载玻片,平皿,试管,烧杯,试管架 ,手术刀片,镊子,三角瓶,胶帽吸管,漏斗架,漏斗,火 柴棒,采血针头,烧杯,金属筛(6.2×104孔/m2),擦镜 纸、铜筛或纱布、玻璃棒,纱布,离心机,青霉素瓶,显微 镜,蒸馏水,甘油与水的等量混合液、饱和食盐水溶。 蠕虫病粪便检查法 四、操作步骤和操作要领: (一)粪便的采集、保存和寄送方法:被检粪便应该是新鲜 而未被污染,最好从直肠采集。大动物按直肠检查的方法采 集。小动物可将食指套上塑料指套,伸入直肠直接钩取粪便 。采取自然排出的粪便,要采取粪堆的上部未被污染的部分 。将采取的粪便装入清洁的容器内。 蠕虫病粪便检查法 采集用品最好一次性使用,如无条件时每次都要清洗,相互不能有污染。采取的粪便应尽快检查,否则,应放在冷暗处或冰箱中保存。当地不能检查而需送(寄)出时,或保存时间较长时,可将粪便浸入加温至50~60℃的5%~10%的福尔马林液中,使粪便中的虫卵失去生活能力,起固定作用,又不改变形态,还可以防止微生物的繁殖。 蠕虫病粪便检查法 (二)直接涂片法 取清洁的载玻片一张,在其上滴1-2滴普通水或1滴甘油 与水的等量混合液,在用牙签或火柴棒头挑取少量被检粪块 与之混匀,夹去较大或较多的粗粪渣,使载玻片上留有一层 均匀的粪液,之后加上盖玻片,置显微镜下观察虫卵。 蠕虫病粪便检查法 (三)漂浮检查法 漂浮法的原理是应用比重较虫卵大的溶液作为检查 用的漂浮液,使寄生虫卵、球虫卵囊等浮于液体表面,进 行集中检查。漂浮法对大多数较小寄生虫卵,如某些线虫 卵、绦虫卵和球虫卵囊等有很好的检出效果,对吸虫卵和 棘头虫卵效果较差。 蠕虫病粪便检查法 1.饱和盐水漂浮法:取5~10g粪便置于100~200ml烧杯( 或塑料杯)中,加入少量漂浮液(饱和食盐水)搅拌混合 后,继续加入约20倍的漂浮液。然后将粪液用金属筛或纱 布滤入另一杯中,舍去粪渣,静置滤液,经40min左右,用 直径0.5~1cm的金属圈,与液面平着接触以蘸取表面液膜 ,提起后将粘着在金属圈上的液膜抖落于载玻片上,如此 多次蘸取不同部位的液面后,加盖片镜检。 蠕虫病粪便检查法 2.试管浮聚法:取2g粪便置于烧杯中或塑料杯中,加入10~ 20倍漂浮液(饱和食盐水)进行搅拌混合,筛滤,滤液注入 试管中,补加饱和食盐水溶液至凸出试管口为止。静置30min 后,用清洁盖玻片轻轻接触液面,取下盖玻片,覆于载玻片 上镜检。 蠕虫病粪便检查法 2.离心机沉淀法:取粪便3g置于小杯中,加10~15倍水搅拌混匀,然后将粪液用金属筛滤入离心管中,在电动离心机以2000~2500r/min的速度离心沉淀1~2min,取出后倾去上层液,再加水搅合,离心沉淀。如此离心沉淀2~3次,最后倾去上层液,用吸管吸取沉淀物滴于载片上,加盖玻片镜检。
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