微生物技术 微生物技术 项目六 微生物菌种保藏技术.ppt

6 冷冻干燥管保存 （lyophilization freeze-drying ) * 微 生 物 技 术 生物工程学院 任务一 微生物菌种保藏 项目六 微生物菌种保藏技术 教 学 目 标 能力目标 知识目标 素质目标 会诱变育种准备操作 ； 能诱变育种的控制过程 ； 会诱变后菌种的筛选 ； 会菌种的保藏操作 ； 了解诱变的原理 ； 掌握诱变剂的种类； 掌握诱变浓度的选择 ； 掌握菌种保藏的原理 ； 诱变过程控制；菌种保藏过程。 “案例”教学法。 “行动导向”教学法。 “演示性”教学法。 “引导-自主学习”教学法。 2 4 教学方法 1 3 菌种保藏过程 重 点 难 点 设置情境---引出课堂任务 案例一：某生物制品企业现要保存一批大肠杆菌生产菌种，保藏期为一年以上，假设你是该企业菌种库的人员，请选择合适的保藏方法并实施。 学生根据学习材料进行讨论设计方案. 1 教师边演示菌悬液制备和冻干过程及其注意事项，边讲解冷冻真空干燥菌种保藏原理等。 教师示范和讲解 1 训 练 任 务 2 分组操作：先制备菌悬液后进行冻干，教师根据学生出现的问题进行有侧重点的示教操作步骤，指出并解释操作中的重点和难点。学生再练习，教师巡回指导，纠正学生操作上的错误，并随时解答学生的疑难问题。 （随堂打分：自我学习能力及操作技能。） 结果展示 教师点评并依据评价指标进行评价 归纳总结 学生代表概括知识点和操作注意事项 3 4 设置情境---引出课堂任务 案例二：我们在实验室液体培养了1罐（5L）沙门氏菌菌种，请你设计一菌种保藏方案并实施，以达到方便保存、保藏期在3-6个月的目的。。 学生学习材料讨论设计方案 1 教师边演示菌种保藏和注意事项，边讲解斜面菌种保藏原理等。 教师示范和讲解 2 学生分组练习任务，教师巡回指导。同时对每个学生进行过程考核和结果考核。 学生练习任务 3 归纳总结 教师引导学生总结 主要知识点和操作 关键。 4 1、准备斜面培养基； 2、无菌划线接种上述斜面上； 3、 将上述斜面放到37 ℃培养。 4、将长旺盛的菌种于4℃保藏。 沙门氏菌的菌种保藏 保藏：将有用的微生物以特定培养形态在特定的环境条件下存放，以保持种的存活、纯粹和遗传性状的稳定。 一、条件及原理 1.???低营养 2.???干燥 3. 隔氧 4. 低温 降低代谢速率或使细胞处于休眠状态 5. 密封 保持干燥、隔氧。 菌种保藏原理 1 单纯传代保存法（斜面或穿刺） 保存期3-6个月 ，适用于细菌或酵母。 2 结合单孢子分离的传代保存法 3-6个月 适用于遗传不稳定的菌种,既保藏了菌种，又保持了生产能力。 3 米孢子保存 密封，4℃冰箱3-6个月；真空抽干后密封，保藏6-12个月。 适用于霉菌的保藏。 常用的保藏方法 4 沙土管保存 4℃冰箱保存，1-3年保存期。 适用于霉菌、放线菌和形成芽孢的细菌的保藏 5 孢子或营养细胞悬浮液保存 悬浮于灭菌的10%-20%甘油介质， 低温冰箱（-50- -70℃）1-2年。 收集菌种 灭菌脱脂牛奶或马血清作为悬浮介质 灭菌安瓿管 预冻 真空冻干 密封， 4℃冰箱，保存3-5年 适用于一切微生物的保存 细胞 10%-20%甘油作为悬浮介质 分装入无菌聚丙烯管 预冻 置液氮内（-196℃）， 保存5-10年 适用于所有微生物、动物和植物细胞的保存 7 液氮管保存 (storage in liquid nitrogen) 设置情境---引出课外任务 案例二：我们在实验室液体培养了1罐（5L）发面用啤酒酵母菌种，请你设计一菌种保藏方案并实施，以达到方便保存、保藏期在一年以上的目的。 训 练 任 务 1 分组操作：接种酵母与液体培养基中培养，教师根据学生出现的问题进行有侧重点的示教操作步骤，指出并解释操作中的重点和难点。学生再练习，教师巡回指导，纠正学生操作上的错误，并随时解答学生的疑难问题。 （随堂打分：自我学习能力及操作技能。） 1、准备液体培养基； 2、无菌接种液体培养基中培养，镜检确认符合要求； 3 、向上述菌液加入15～20％的无菌甘油，混匀取1～2ml上述混合物，置无菌离心管内。 4、进行必要的标识置低温冰箱中。 酵母菌菌种保藏 * * *