2实验二诱变剂微核测试.ppt

《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 湖州师范学院 生命科学学院生物系 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 一、实验目的 1 、了解细胞微核形成的机理及其 形态特点， 2 、学习植物根尖细胞的微核检测 技术。 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 二、实验原理 ※ 微核 (micronuclei) 简称 MCN ，是真核类生物 细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或 化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核 呈圆形或椭圆形，游离于 主核之外 ，大小应在 主核 1/3 以下 。微核的折光率及细胞化学反应性 质和主核一样，也具合成 DNA 的能力。 ※ 微核形成 : 有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断 片不能向两极移动，游离于细胞质中，在间期 细胞核形成时，在核产生一到几个很小的圆形 结构 — 微核，直径大约是细胞直径的 1/20 ～ 1/5 。 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 微核率 的大小是和用药的剂量或辐射累积效应 呈正相关 ，因此，微核是常用的遗传毒理学指 标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。微核测 试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、 新药试验、染色体 遗传疾病及癌症前期诊断 等各方面。 二、实验原理 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 三、实验材料 大蒜或蚕豆 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊 子、载玻片及盖玻片等。 盐酸、甲醇、石炭酸品红、硫酸铜、重 铬酸钾。 四、实验仪器设备及药品 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 五、实验步骤 1 、幼根的培养 （ 1 ）大蒜 ：提前 3 — 5d 进行培养，将大蒜瓣 剥去外边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起 的根原体，将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适 宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部浸 入水中，置培养箱中，注意每天换水，经 3 — 5d 后，即可长出 1-2cm 的嫩根。 （ 2 ）蚕豆 ：浸种 24h ，期间换水 2 次，25℃ 催芽， 36-48h 生根 1-2cm 。 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 2 、处理根尖 ： 阳性检测采用 0.1g/L 硫酸铜（大 蒜）、 0.5g/L 重铬酸钾（蚕豆），对照用自来 水处理，处理时间 24h ，处理液浸没根尖。 3 、恢复培养 ：处理后的根尖用自来水浸洗 3 次， 每次 2-3min ，洗净后在水中恢复培养 24h 。 4 、固定 ： 切取 1cm 左右的根尖，用甲醛：冰醋酸 （ 3 ： 1 ）固定液固定 24h 后弃去固定液，移入 70 ％酒精中， 4 ℃ 冰箱保存。 五、实验步骤 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 5 、 酸解 ：弃去固定液，用蒸馏水漂洗 2-3 次， 吸净水，加入 6M 盐酸浸没根尖，于室温解 离 10min ，弃去盐酸，漂洗根尖 2-3 次，彻 底洗净盐酸。 6 、染色 ：截下 1-2mm 长的根尖，滴加适量 的石炭酸品红染液，染色 10min ，加盖玻片， 压片观察，记录有微核的细胞数目。 五、实验步骤 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 六、实验结果 1 、微核 形成 与 识别： 首先在低倍镜中找到 分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的 部位，再转高倍镜观察，找到微核。 （ 1 ）在主核大小的 1/3 以下，并与主核分 离的小核。 （ 2 ）小核着色与主核相当或稍浅。 （ 3 ）小核形态为圆形、椭圆形或不规则 型。 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 1 、微核 形成 与 识别 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 微核 微核 1 、微核 形成 与 识别 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 1 、微核 形成 与 识别 《 遗 传 学》校 级 精 品 课 程 2 、微核千分率（ MCN ‰ ） 每一处理观察 3 个根尖，每个根尖计数 100 个 -300 细胞，统计其中含的细胞数， 计算平均数，即为该处理的微核千分率。 六、实验结果