质 粒 提 取 原理及步骤[汇编].pdfVIP

质 粒 提 取 原理及步骤 一、导论 　　已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA， 这些方法都含有以下3 个步骤： 1. 细菌培养物的生长。 2. 细菌的收获和裂解 3. 质粒DNA 的纯化。 （一）细菌培养物的生长 　　从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生 长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体（如pUC 系列）都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚 期，就可以大量提纯质粒。此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体( 如pBR322) 由于不能如此自由地复制，所以需要在得到部分生长的细菌培养物中加入氯霉 素继续培养若干小时，以便对质粒进行性扩增。氯霉素可抑制宿主的蛋白质合成，结果阻 止了细菌染色体的复制，然而，松弛型质粒仍可继续复制，在若干小时内，其拷贝数持续 递增。这样，像pBR ３２２－类的质粒，从经氯霉素处理和未经处理的培养物中提取质粒 的产量迥然不同，前者大为增高。多年来，加入足以完全抑制蛋白质合成的氯霉素 μg/ml) 已成为标准的操作、用该方法提取的质粒DNA 量，对于分子克隆中几乎所有想象到的工 作任务。 （二）细菌的收获和裂解