抗菌肽及抗菌子机理.ppt

抗菌肽及抗菌分子机理 07202张琳琪冯瑶 概述 冷抗菌肽( antimicrobial peptides)是具有抗菌活性短肽的总 称,这些短肽分子量在2000-7000左右,由20~60个氨基酸残 基组成。这类活性肽多数具有强碱性、热稳定性及广谱抗 菌等特点 ÷随着分子生物学技术的发展抗菌肽已成为近年来分子免疫 学和分子生物学的研究热点。研究的内容包括:抗菌肽的分 离与提纯,氨基酸序列的分析,蛋白质构型与功能的关系;:抗菌 肽的作用机理;应用基因工程克隆和表达抗菌肽基因,改造 合成抗菌肽基因以及动植物的转抗菌肽基因工程等,其中昆 虫抗菌肽基因工程研究最受重视。 这种内源性的抗菌肽经诱导而合成在机体抵抗病原 体的入侵方面起着重要的作用,被认为是生物非特异 性免疫功能的重要防御成分。抗菌肽具有广谱杀菌 作用,对某些真菌、原生动物耐药性细菌都有杀灭 作用,并可选择性的杀伤肿瘤细胞抑制乙型肝炎病 毒等的复制。 抗菌肽的分类 迄今为止从不同生物体内诱导获得的抗菌肽已有 200多种仅从昆虫体内分离得到的就有170余种。 根据结构不同可把抗菌肽分为5类 冷单链无半胱氨酸(cys)的抗菌肽,或由无规则卷曲连 接的两段a-螺旋组成的肽。该类包括天蚕素 Cecropins, Ma-gainins等。 Magainins最初是从 非洲爪蟾的皮肤中发现的,它是爪蟾的皮肤在一定的 环境压力下分泌出的抗感染和促进伤口愈合的成分 由两个紧密相连的肽链组成每一个肽链有23个氨基 酸,低浓度便可抑制许多细菌和真菌生长。 2.富含某些氨基酸残基但不含oys的抗菌肽。如富含脯氨酸 Pro)或甘氨酸(Gly)残基的抗菌肽。如从猪肠内分离的抗 菌肽PR39中Pro含量占49%。鞘翅肽 Coleoptericin和半 翅肽 Hemiptericin的全序中富含Gly。 3.含一个二硫键的抗菌肽,该二硫键的位置通常在肽链C端。 如爪蟾皮肤细胞中产生的 Brevinins 有两个或两个以上二硫键,具有β-折叠结构的抗菌肽。如绿 蝇防御素( Phormindefensin),分子内有6个cys形成3个分 子内二硫键,肽链C末段是带有拟β转角的反向平行的β片 层。实验证明,分子中的二硫键在其抗菌作用中至关重要 5.由其他已知功能较大的多肽衍生而来的具有抗菌活力的肽。 抗菌肽的作用机制 3·1胞膜攻击作用 3·2诱导细胞凋亡 33线粒体攻击作用 3·4对细胞核染色体的影响 3·5对癌细胞骨架的断裂作用 3·6抑制蛋白质及细胞壁合成 3.1胞膜攻击作用 大多数抗菌肽 的作用机制是破坏肿瘤细胞或细 菌质膜结构,引起细胞内容物大量渗 终导致 瘤细胞和细菌的死亡而抗菌肽分子的结构特征是保 证上述机制发挥作用的重要基础。 昆虫天蚕素的抗菌肽分子是通过其两亲性α-2螺旋 静电吸引而结聚棄在质生然后抗菌分子中的 疏水段C端(酰胺基)Q-2螺旋插入到疏水的细菌细胞 膜中央,双亲的α-2螺旋留在质膜表面打乱了质膜 蛋白质和脂质原有的排列秩序,使得膜外正电荷增多, 超过阈值导致膜去极化。田子抗菌肽分子的02螺 旋是亲、疏水两亲性的,所以当抗菌肽分子相互聚集 在一起时可形成离子通道,导致阳离子外流,最后细 菌失去保护,不能保持正常的渗透压而死亡。 冷从猪小肠中分离得到的抗菌肽(cecp)也是通过膜攻 击来完成对细菌的杀伤,但其C端为羧基而非酰胺基, 其抗菌谱也有所不同,其作用机制主要是通过碱性氨 基酸与细菌外膜表面的磷脂酰头部结合,由于分子的 旋转导致cecp的疏水基与膜的疏水区结合超过阈 值时,则在质膜上形成瞬时小孔,导致菌体内容物溢 出,菌体裂解死亡。防御素作用于细胞膜,可增加生 物膜的通透性而发挥作用。 在人工脂质膜的实验显示,防御素作用于膜上形成稳 定的通道,且具有依赖电压的传导特性,因为防御素 分子很小,不能以单聚体的形式造成膜穿孔,但防御 素分子能以多聚体的形式作用于胞膜。 3.2诱导细胞凋亡 Ma等以融合抗菌肽DP1局部注射到小鼠实体瘤内 研究DP1对肿瘤细胞株MCA20凋亡的影响,发现 DP1可迅速诱导肿瘤细胞凋亡,并使肿瘤体积缩小。 冷Chen等以抗菌肽 RGD tachyplesin作用于前列腺 癌细胞株TSU,以荧光免疫法和 Western印迹杂交法 检测结果发现凋亡相关蛋白 caspase9、 caspase8、 caspase3以及Fas配体表达均升高,提示抗菌肽 RGD tachyplesin可以诱导与Fas相关的凋亡。 由此推断诱导凋亡可能是某些抗菌肽的作用机制之 33线粒体攻击作用 ÷ Bobek等以人唾液中提取的抗菌肽MUc7作用于临床常见的 真菌、杆菌和球菌,发现MUC7对真菌和细菌都有很强的杀伤 作用。在超微结构中发现线粒体出现肿胀、空泡化、