常规病理组织处理精品.ppt

病理常规组织处理  组织标本离体后,要经过固定、脱水、透明 浸蜡和包埋等一系列的后续处理。组织处理的 每一个步骤都非常重要。 ■因为标本的取材,部位的选择等等,都或多或少 地会影响到组织处理的程序、染色的效果以及最 终的诊断是否合适 组织结构的保存、有效成分的保留,取决于组织 处理所使用的试剂和各步骤处理的时间等因素 为病理诊断提供优质的切片需要技术人员在日常 的工作中不断积累熟练的技巧和经验  固定 病理标本的制作和组织处理都必 须先进行固定。如果固定不佳,制片 的其它程序将非常困难,可以说没有 很好的固定就没有很好的H染色,就 会造成诊断困难,甚至误诊,这足以 证明固定的重要性  概念:组织离体后,采用某些办法使其 细胞内物质尽可能接近其生活状态时 的形态结构和位置的过程。(应用各 种方法使病理标本尽量保持其离体前 状态的过程) 目的:防止组织细胞自溶和腐败,保持 细胞内成分(蛋白质、脂肪、碳水化 合物或酶类)与原有的结构与生活时 相仿  方法: 1物理学方法:如低温冷冻,干冰 饺界e,邮固态无水碳酸)冰冻真空 ,石蜡渗入法。 2化学方法:采用各种化学溶液作固定 液,使组织细胞进入固定状态。这是 国内蕞常用的方法。  注意: 1组织离体及时固定(大标本切开固定) 2组织块大小适宜(15×1.5×0.2厘米为宜) 3合理选择固定液(免疫组化可以选择多聚甲醛和中性缓 冲甲醛;我病理科大标本一般选择中性缓冲甲醛,它可以 兼顾常规染色和免疫组化。小标本选用AAF液) 4固定液的量为组织5倍以上(最少也要没过组织) 5固定时间得当:大标本(6-12H)小标本(3-6II),时 间太短,影响组织固定的效果,对以后一系列的处理都有 影响,切片质量难以保证。组织长时间的固定,福尔马林 会产生一种酸,影响核的染色。另外,长时间的固定往往 会出现福尔马林色素,尤其是造血器官的标本,更应注意。 固定时间过长,可降低抗原的活性,影响组化。  微小破碎组织,在包埋操作时易于识别操 作,组织处理前可浸泡在1%伊红液中5-10 分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保 留,但是在随后的切片染色中可以洗去不 影响正常的染色  常用固定液的介绍和配制 110%中性缓冲福尔马林: ■甲醛100ml,无水磷酸氢二钠(Na2HPO4) 13g 磷酸二氢钠(NaH2PO4H2O)40g,蒸 馏水900ml ■特点:渗透力强,收缩小,对抗原保存较 好,此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。  2AAF液:95%乙醇85ml,甲醛(浓)10ml, 冰醋酸5ml ■特点:此液除有固定作用外,兼有脱水作 用,因此,固定后可直接入95%乙醇脱水。 其他还有很多固定液,不一一介绍,有些 液体混合后使用比单独使用效果更佳,作 用互补,真正达到固定的目的  二水洗 1固定后必须水洗(15-30min),流水冲 洗最佳,特别是固定时间长的组织。 水洗不彻底后果:福尔马林色素沉着 脫填抗淼结否务j统化标记中