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综合项目一 不同蔬菜水果中基本营养成分分析 实验一 总糖含量的测定（ 3,5-二硝基水杨酸法） 一、实验目的 1、掌握总糖的测定原理。 2、学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理 三、实验试剂 1、2mol/L 氢氧化钠溶液：称取 4g 氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定 容至 50mL。 2、3,5-二硝基水杨酸试剂：称取 0.325g 3,5-二硝基水杨酸溶于 15mL 热蒸馏水中，溶解后移入 50ml 容量瓶中，加入 2mol/L 氢氧化钠溶液 16.25mL，再加入 2.25ml 丙三醇，摇匀，冷却后定容至 50mL。 3、2mg/mL 葡萄糖标准溶液：称取 0.04g 葡萄糖，加少量的蒸馏水溶解后，定容至 20mL。 4、6mol/L 盐酸：取 25mL 浓盐酸用蒸馏水稀释至 50mL。 5、6mol/L 氢氧化钠：称取 12g 氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至 50mL。 四、实验步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作 取 6 支试管，按下表加入 2mg/mL 葡萄糖标准溶液和蒸馏水： 管号 2mg/mL 葡萄糖 蒸馏水 /mL 葡萄糖浓度 标准溶液 /mL OD 540 mg/mL 1 0 1 0 2 0.2 0.8 0.4 3 0.4 0.6 0.8 4 0.6 0.4 1.2 5 0.8 0.2 1.6 6 1 0 2 在上述试管中分别加入 3,5-二硝基水杨酸试剂 2mL ，摇匀后于沸水浴中加入 2min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却， 各加入蒸馏水 9mL ，摇匀，在 540nm 波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（ mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。 2、总糖的提取 称取 1g 实验材料（如新鲜果蔬），充分研磨后， 放在锥形瓶中， 加入 6mol/L 盐酸 10mL，蒸馏水 15mL，在沸水浴中加热 30min 。水解完毕后， 冷却至室温后，加入 8mL 6mol/L 氢氧化钠，最终用蒸馏水定容至 50mL，此为总糖水解液，用于总糖测定。 3、总糖含量的测定 取 4 支试管，按下表加入不同溶液： 总糖水解液 3,5-二硝基 管号 蒸馏水 /mL 水杨酸试剂 OD 540 /mL /mL 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 加完试剂后，摇匀后于沸水浴中加入 2min 进行显色，取出后用流动水迅速 冷却，各加入蒸馏水 9mL ，摇匀，在 540nm 波长处测定光吸收值。测定后，取 样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的糖含量（ mg/mL）。 4、计算总糖的百分含量 总糖 =（C×V / m× 1000）×稀释倍数× 0.9×100% 式中 ,C 为总糖提取液的浓度 mg/mL ；V 为总糖提取液的总体积 mL ；m 为样 品质量 g 五、实验结果 1、葡萄糖标准曲线的绘制 （ 1）光吸收值测得结果 管号 2mg/mL 葡萄糖 蒸馏水 /mL 葡萄糖浓度 OD 540 标准溶液 /mL mg/mL 1 0 1 0 2 0.2 0.8 0.4 3 0.4 0.6 0.8 4 0.6 0.4 1.2 5 0.8 0.2 1.6 6 1 0 2 （ 2）葡萄糖标准曲线图： （ 3）回归方程为： 2、样品总糖含量的测定 1）材料 ____________总糖含量的测定 总糖水解液 3,5-二硝基 管号 蒸馏水 /mL 水杨酸试剂 OD 540 /mL /mL 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为 。 根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为 ________________。请说明具 体计算过程： 从而得出样品 __________总糖的百分含量为 _________________。请说明具 体计算过程： 2）材料 ____________总糖含量的测定 总糖水解液 3,5-二硝基 管号 蒸馏水 /mL 水杨酸试剂 OD 540 /mL /mL 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为 。 根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为 ________________。请说明具 体计算过程： 从而得出样品 __________总糖的百分含量为 _________________。请说明具 体计算过程： 3）材料 ____________总糖含量的测定 总糖水解液 3,5-二硝基 管号 蒸馏水 /mL 水杨酸试剂 OD 540 /mL /mL 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为 。 根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为 ________________。请说明具 体计算过程： 从而得出