qPCR原理及应用[汇编].pdfVIP

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2020-09-30 发布于江苏
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qPCR原理及应用[汇编].pdf

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实时荧光定量PCR 的原理和应用 2010.10 雅睿生物黄宝福 1 / 48 目录 • 实时荧光定量PCR原理 PCR 荧光标记绝对定量和相对定量 • 实时荧光定量PCR应用 • 实时荧光定量PCR发展 digital PCR,qPCR Array 2 / 48 实时荧光定量PCR原理 3 / 48 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR) 1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA 基因。 4 / 48 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR) 1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR）基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 5 / 48 PCR DNA 5’ 3’ 解旋解链 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 结合引物 TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 子链延长 3’ 5’ 6 / 48 PCR 5’ 3’ DNA ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 解旋解链 DNA GGAUCG 3’ 聚合酶 5‘ 结合引物 5‘ DNA 3’ AUCGCG 聚合酶子链延长 TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ 7 / 48 PCR 5’ 3’ D