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人苗条素受体 () 酶联免疫分析（） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人苗条 素受体 () 含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人苗条素受体 () 水平。用纯化的人苗条素受体 () 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入苗条素受体 () ，再与 标记 的苗条素受体 () 抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物 显色。 在 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的苗条素 受体 () 呈正相关。用酶标仪在 波长下测定吸光度（ 值），通过标准曲线计算样品中人苗条 素受体 () 浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 孔配置 孔配置 保存 说明书 份 份 封板膜 片 () 片 () 密封袋 个 个 酶标包被板 × × ℃ 保存 标准品 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 标准品稀释液 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 酶标试剂 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 样品稀释液 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 显色剂液 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 显色剂液 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 终止液 ×瓶 ×瓶 ℃ 保存 浓缩洗涤液 ( ×倍 ) ×瓶 ( ×倍 ) ×瓶 ℃ 保存 样本处理及要求： .血清：室温血液自然凝固 分钟，离心 分钟左右（ 转分）。仔细收集上清，保存过程中如 出现沉淀，应再次离心。 .血浆：应根据标本的要求选择、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 分钟后，离心 分钟 左右（ 转分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 .尿液：用无菌管收集，离心 分钟左右（ 转分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形 成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 .细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 分钟左右（ 转分）。仔细收 集上清。检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 万 左右。通过反复冻 融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 分钟左右（ 转分）。仔细收集上清。保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。 .组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的，。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融 化后仍然保持℃的温度。加入一定量的（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 分钟 左右（ 转分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 1 / 3 操作步骤： . 标准品的稀释与加样： 在酶标包被板上设标准品孔 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 μ， 然后在第一、第二孔中加标准品稀释液μ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 μ 分别加到 第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 μ，混匀；然后在第三孔和第四孔 中先各取 μ 弃掉，再各取 μ 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品 稀释液，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 μ 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八 孔中分别加标准品稀释液 μ，混匀后从第七、第八孔中分别取 μ 加到第九、第十孔中，再在 第九第十孔分别加标准品稀释液 μ，混匀后从第九第十孔中各取 μ 弃掉。 . 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品 孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 μ，然后再加待测样品 μ（样品最终稀释 度为 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 . 温育：用封板膜封板后置℃温育 分钟。 . 配液：将（ 的 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水（ 的 倍）倍稀释后备用。 . 洗涤：小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干，每孔加满洗涤液， 静置 秒后弃去， 如此重复 次， 拍干。 . 加酶：每孔加入酶标试剂 μ，空白孔除外。 . 温育：操作同。 . 洗涤：操作同。 . 显色：每孔先加入显色剂 μ，再加入显色剂 μ，轻轻震荡混匀，℃避光显色分钟. . 终止：每孔加终止液 μ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 . 测定：以空白空调零， 波长依序测量各孔的吸光度（ 值）。 测定应在加终止液后 分钟 以内进行。 注意事项： ． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完， 板条应装入密封袋中保存。 ． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 ． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 ． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高 （样本 值大于 标准品孔第一孔的 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ 倍）后再测定，计算时请最后 乘以总稀释倍数（××）。 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 ． 底