肿瘤学答案 (1)汇总.docVIP

肿瘤基础题： 基因突变的方式与原癌基因活化 A 点突变：是导致癌基因活化的主要方式，H-ras 基因第12位密码子GGC变为GTC，从而使编码的甘氨酸变为缬氨酸，使其产物P21蛋白发生改变导致ras 基因活化。 B DNA扩增：一些基因通过不明原因复制成多拷贝以游离形式存在称双微体，或再次整合入染色体形成均染区，一般表示高度的染色体结构破坏与不稳定性，基因考贝数增多往往导致表达水平增高，一般认为，基因扩增和过量表达均可影响细胞的正常生理功能。 C 染色体重排：淋巴瘤第8号染色体与第14号易位，慢粒9号与22号易位等。这种异常表达导致细胞的增殖和分化异常。 D 癌基因甲基化改变：DNA甲基化状态的改变可导致基因结构和功能的异常，是细胞癌变过程中重要的一步。DNA甲基化有重要的生物学意义：控制基因表达，维护染色体完整性、调节DNA重组、抵御外来DNA入侵等。低甲基化导致一些正常情况下受到抑制的癌基因或相关因子得到大量表达，另外，也会导致整个基因组的不稳定性增加。癌基因DNA甲基化水平越低，其表达水平越高，肿瘤的生物学特性越复杂。因此，DNA甲基化状态的分析有可能成为判断肿瘤生物学特性及临床预后的重要指标之一。 E 基因过量表达：基因表达水平改变是细胞癌变的早期事件，Met 基因过量表达主要发生胃癌、异型增生和肠上皮化生；Ras过量表达出现在慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生及胃癌中，是细胞增殖活跃的指标。提示基因表达水平改变是癌变的一个重要因素。 癌变二阶段学说 绝大多数肿瘤的发生都是一个受多因素作用，表现为多阶段的复杂过程，癌发生的二阶段学说是指癌变少由两个既有区别又有联系的阶段构成，第一个为特异性的激发阶段，由使用一次小剂量的致癌物所引起，使正常细胞变为潜伏性瘤细胞，第二个阶段为比较非特异的促进阶段，由巴豆油等促癌物促成，使潜伏的瘤细胞进一步发展成为肿瘤。现已证明，这个过程见于肝、肺、膀胱、食管、乳腺、胃、胰腺癌。 激发过程是正常细胞经致癌物作用后转变为潜伏性瘤细胞的过程，比较短暂，一般是不可逆的，已证实大部分致癌物为诱变物，因此，激发过程具有诱变性质，即涉及到遗传突变。促进过程的初期具有可逆性，而后期是不可逆的，促癌物本身不具诱变性，促癌过程是被激发细胞进一步增殖，逐步形成克隆的选择过程，在这一过程中激发细胞生长失控，逃脱宿主免疫监视，逐步形成恶性表型，继而发展成浸润、转移性癌。 基因突变的检测方法 PCR-SSCP法：是在非变性聚丙酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依期碱基序列不同而形成不同构象，一个碱基改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。方法简便快速，适合大样本筛选。 杂合双链分析法：由于突变型和野生型DNA形成异源杂合双链DNA在其错配处形成一突起，在非变性凝胶中电泳时会产生与相应的同源双链DNA不同的迁移率。 突变体富集PCR法：基本原理是利用Ras 基因某个编码子部位存在已知的限制性内切酶位点，用连续2次巢式PCR扩增包括K-ras 第12、13编码子的DNA片断，在两次扩增反应之间用相应内切酶消化，野生型因被酶切不能进入第2次扩增，而突变型则能完整进入第2次PCR扩增并得到产物的富集。 变性梯度凝胶电泳法：当双链DNA在变性梯度凝胶中进行到与DNA变性温度一致的凝胶位置时，DNA发生部分解链，电泳迁移率下降，当解链的DNA中有一个碱基改变时，会在不同的时间发生解链，则因影响电泳速度变化的程度从而被分离。 化学切割错配法：将待测DNA片断与相应的野生型DNA片断或DNA和RNA片断混合变性杂交，在异源杂合的双链核酸分子中，错配的C能被羟胺切割，错配的T能被四氧化锇切割，经变性凝胶电泳即可确定是否存在突变。检测片断最长的方法。 等位基因特异性寡核苷酸分析法（ASO）：以PCR和ASO相结合，设计一段20bp左右的寡核苷酸片断，其中包含了突变部位，以此为探针，与固定在膜上的样品DAN杂交。 连接酶链反应：是以DNA连接酶将某一DNA链的5’-磷酸与另一相邻3’-羟基连接为基础，应用二对互补的引物，双链DNA经加热变性后，二对引物分别与模板复性，若完全互补，则在连接酶作用下，使相邻两引物的5’ 等位基因特异性扩增法：用于对已知突变基因进行检测，通过设计两个5’端引物，一个与正常DNA互补，一个与突变DNA互补，对于纯合性突变，分别加入这两种引物及3 RNA酶A切割法：一定条件下，异源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被RNase A 切割，切割产生可通过变性凝胶电泳分离。 染色体分析：主要有荧光原位杂交技术、PRINS法和比较基因组杂交技术。 DNA序列分析：原理是双脱氧终止法，现可自动化测序。 DNA芯片：基于杂交测序技术基础上建立起来的。将制备好的DNA片断排列在固相载体上