免疫学实验课件：实验三（2）琼脂免疫扩散实验.pptVIP

琼脂免疫扩散实验;实验目的与要求; 实验原理：;试剂与器材 1.2%的琼脂糖（用生理盐水配制） 已知抗原、待检血清、阳性血清、阴性血清 平皿或（载玻片）、酒精灯、湿盒、打孔器、37℃恒温箱、移液器等。 ;操作方法;封底:将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻灼烧，用手背感觉微烫即可。 加样: 1）抗体效价测定：用移液器加样于中央孔加入已知抗原，于周围孔加倍比稀释的血清，每个稀释度加一孔。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。 2）阴阳性检测：中央孔加抗原，外周孔分别加待检血清，要设立阴性血清和阳性血清对照。 扩散:加样完毕后，将琼脂板放湿盒中，保持一定的湿度，置37℃温箱中24h-48后，取出观察结果。;结果观察: 1、若凝胶中抗原、抗体是特异性的，则形成抗原抗体复合物，在两孔之间出现清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72h仍未出现沉淀线则为阴性反应。 2、抗体效价测定:以出现沉淀带的血清最高稀释倍数为该血清的琼扩效价。;3、抗原特异性与沉淀线形状的关系: 1,根据抗原的成份可有以下三种现象:(1)若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形;(2)若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉;(3)若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。 2,相应抗原抗体所形成的沉淀线，如二者浓度相当，沉淀线在孔中央，二者浓度不当时，则沉淀线偏向浓度低的一侧 ;注意事项: 加样量一定要精确，并且不同逸出孔外，否则结果不好观察; 制板时，玻片要清洁，边缘要整齐，加琼脂糖时要避免产生气泡; 打孔时注意避免产生裂缝或将琼脂与玻片脱离。