凝胶色谱法的原理及方法血红蛋白的提取及分离.docxVIP

------------- 精选文档 ----------------- 【课 题】： 课题 6 血红蛋白的提取和分离 【备 课 人】： 【备课时间】： 【上课时间】： 【课 型】：复习 【课 时 数】： 1 课时 【复习目标】 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离， 使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。 【复习重点与难点】 复习重点：凝胶色谱法的原理和方法。 复习难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【知识回顾】： 一、实验原理 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1 ．凝胶色谱法（分配色谱法） ： （ 1 ）原理：分子量 大的分子通过 多孔凝胶颗粒的间隙 ，路程短 ，流动快 ；分子量 小的分子 穿过 多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢 。 （ 2 ）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （ 3 ）分离过程： 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊ 洗脱 ：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （ 4 ）作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。 ．缓冲溶液 可编辑 ------------- 精选文档