从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)（1）.pdfVIP

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序 一、目的 本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病 菌检测 的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。 二、适用范围： 本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保 存的梯相关操作。 三、生物安全要求 标本及相应的致病菌操作必须在 BSL-2 生物安全实验室的生物安全 柜中进行。 四、试剂及仪器设备 4.1 试剂 采便盒、Cary-Blair 运送培养基、亚硒酸增菌液 （SF）、改良亚硒酸盐 磺绿增菌肉汤（SBG ）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂 （XLD ）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS ）、 三糖铁（TSI ）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU ）、沙门氏菌属诊断血清、 志贺氏菌属诊断血清、API20E 生化试剂条、磁珠菌种保存管 4.2 仪器设备 恒温培养箱、微生物鉴定仪 五、采样方法 5.1 标本应为新鲜的或转移至 Cary-Blair 运送培养基的粪便或肛拭 子，最优标本是转移到Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子。肛拭子不 1 是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。 5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓 血样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混 入尿液、水和其他物质。 5.3 肛拭标本 ：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采 用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm 处〈儿 童约2-3cm ），同一方向轻轻旋转2-3 周。以目测能见到粪便为准。插 入Cary-Blair 运送培养基。 5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h； 如不能立即送检，应放入Cary-Blair 运送培养基中冷藏条件下24 小 时内送检。 六、检验程序 粪便标本或肛子 XLD 或麦康凯 SBG 增菌 XLD 或显色平板 可疑菌落接种TSI 和MIU 可疑菌落接种TSI 和MIU 生化符合者做血清凝集和 生化符合者做血清凝集和系 系统生化反应 统生化反应 菌株保存管保存菌株上送 七、操作步骤 2 7.1 分别标记一个XLD 平板（或YS 平板、麦康凯平板）和 1 管 9ml 改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG ）（或SF 增菌液或沙门志贺培 养液）。 7.2 用1 个无菌拭子取少量标本（不要使拭子 粘得太多，尽量从 可见血或黏液的部位收集）接种在XLD 平板的第一区，接着把拭子 放入SBG 增菌液。再灭菌接种环在XLD 平板的其余区进行划线接种。 如果是Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增 菌液与平板。 7.3 所有培养基均放入 36℃±1℃培养，SBG 的最佳增菌时间是 16～18h （建议每天下午4~5 时接种标本，第二天早上8~10 时用增菌 液划平板）。 7.4 观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。 7.4.1 XLD 平板可疑菌落观察：志贺菌在XLD 平板上为粉红或无 色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径1-2mm ，而大部 分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规 则，直径2-3mm 。大多数沙门菌在XLD 平板上中心黑色的透明、光 滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。（图2 ） 7.4. ２YS 平板可疑菌落观察： 7.4. ３麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至 浅粉色、半透明