感染性疾病病原体快速诊断[参考].pptVIP

镜下比较 图2. 夹层杯法（新方法）：菌量多，背景清晰，易于观察 图1. 直接涂片法（传统方法）：菌量少，背景不清晰 * 精品PPT·借鉴参考 夹层杯诊断技术的优点 阳性率高 背景清晰，易于观察 易于标准化 检测速度快 生物安全性好 夹层杯诊断 技术的优点 * 精品PPT·借鉴参考 结核夹层杯技术 标本要求： （1）痰液要求新鲜，留取清晨深咳出的第一口痰液，留痰时，患者以清水漱口３次，然后用力咳出气管深处的痰 （2）用氢氧化钠处理完全。 临床应用：用于结核分枝杆菌的初筛 * 精品PPT·借鉴参考 结核感染T细胞检测技术 是以ELISPOT技术 检测结核感染的新方法 ，ELISPOT是近20 年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术，是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一。 * 精品PPT·借鉴参考 原 理 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，作为免疫应答的一部分，T细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T细胞，包括CD4和CD8。 结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化T淋巴细胞，这些淋巴细胞在体外再次受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌γ-干扰素，通过检测 体外分泌的IFN-γ来诊断是否存在结核感染。 * 精品PPT·借鉴参考 活动性结核与潜伏感染 接触活动性结核病患者 暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除 没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被发现 X-光/ CT 扫描显示正常 没有抗体应答 诊断困难 传统的结核感染检测只有 TST（PPD） 机体被感染 受机体免疫力抑制 没有临床症状 终身处于感染状态 潜伏感染 有临床症状 具有传染性 结核杆菌可以通过涂片、培养检测出 胸部的 X-光或 CT 扫描显示异常 肺外结核难以诊断(特别是儿童) 活动性结核 5% 5% 再次激活 * 精品PPT·借鉴参考 活动性结核与潜伏感染 新发TB病例来自潜伏性结核感染人群 潜伏性结核感染（hidden epidemic）人群数量巨大 ——“定时炸弹” 若想控制活动性TB，必须先控制潜伏性结核感染 鉴别高危人群 预防性治疗 免疫接种 活动性TB – 每年900万新发病例 仅为冰山一角 Latent TB - “hidden epidemic” - 2 billion people infected * 精品PPT·借鉴参考 结核感染T细胞检测 * 精品PPT·借鉴参考 γ-干扰素释放实验 （IGRA，interferon- gamma release assay） 酶联免疫斑点技术 （ELISPOT，Enzyme-Linked ImmunoSpot assay） 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） culture filtrate protein 10 ） 技 术 背 景 * 精品PPT·借鉴参考 结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。 由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。 基于IGRA原理的检测项目目前已被美国、加拿大、英国、德国、意大利、瑞士、法国、荷兰、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中 γ-干扰素释放实验（IGRA） * 精品PPT·借鉴参考 酶联免疫斑点技术（ELISPOT） * 精品PPT·借鉴参考 酶联免疫斑点技术（ELISPOT） 近二十多年来，随着技术改良，ELISPOT 分析技术已经是当世公认的最灵敏的抗原特定T细胞的体外检测技术 结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA 技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况，灵敏度高。 其技术原理，可一句话概括为：用抗体捕获培养中细胞所分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 * 精品PPT·借鉴参考 结核杆菌特异抗原 ESAT-6与CFP10抗原 由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白 所有的卡介苗（BCG）均丢失该基因序列 绝大多数的环境分枝杆菌也不存在RD1区 * 精品PPT·借鉴参考 操作步骤 ① ② * 精品PPT·借鉴参考 操作步骤 ⑤ ⑥ ④ ③ 孵育1小时 * 精品PPT·借鉴参考 降钙素原 PCT : 分子结构 血清降钙素(CT)的前肽物质 分子量：14.5 kDa 由116个氨基酸组成的糖蛋白质 无激素活性 11号染色体上 的单拷贝基因 转录 甲状腺滤泡细胞 降钙素原前体 内源多肽酶 降钙素