发酵生产技术 种子扩大培养 第五章 种子扩大培养.ppt

第五章 种子扩大培养 第一节 种子制备工艺 第二节 影响种子质量的因素及控制 第一节 种子制备工艺 定义 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 这些纯种培养物称为种子。 种子制备的工艺流程 种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段 培养15小时的枯草芽孢杆菌 一、实验室种子制备 实验室种子的制备一般采用两种方式 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子，操作简便，不易污染杂菌。 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法。 二、生产车间种子制备 实验室制备的孢子或液体种子移种至种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝）体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。满足发酵灌对种子 的要求。 1. 种子罐级数的确定 种子罐的作用：主要是使孢子发芽，生长繁殖成菌丝，接入发酵罐能迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于： —菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度； —所采用发酵罐的容积 —所需种子数量(1%-5%计算) 确定种子罐级数需注意的问题种子级数越少越好，可简化工艺和控制，减少染菌机会;种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐生产率，增加染菌机会; 虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定。但也与所选用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速了孢子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。  第二节 影响种子质量的因素及控制 菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； 生理形状稳定； 生长一致； 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求 无杂菌污染； 保持稳定的生产能力。 从菌体形态、生化指标等方面判断 二、影响种子质量的因素 培养基与培养条件 接种龄与接种量 通常接种量： 细菌1~5%， 酵母菌5~10%， 霉菌 10% 放线菌 7~15%，有时20~25% 本章小结 种子制备的工艺流程: 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段 影响种子质量的因素及控制 培养基与培养条件 接种龄与接种量 生产发酵罐的无菌接种 单项选择题 1、在发酵工业生产中，使用的种子应处于（?? ）。 A、停滞期??? B对数期??? C稳定期??? D衰亡期 2、在发酵工业生产中，把处于对数期的种子接种到发酵罐新鲜培养基时，几乎不出现（?? ），这样可在短时间内获得大量生长旺盛的菌体，有利于缩短生产周期。 A、停滞期??? B 对数期??? C稳定期??? D衰亡期 3、工业生产用的菌种，在下列哪个时期选取最佳 A、调整期 B、对数期 C、稳定期 D、衰亡期 思考题 1.何谓种子扩大培养？发酵生产为何要进行种子扩大培养？ 2.简述种子扩培的工艺流程 3.生产发酵罐的无菌接种主要应注意什么问题？（提示：接种龄、接种量、无菌操作等） * * * 华南农业大学食品学院生物工程系 Slant stock Shake flask 1 to 20 L fermentor Laboratory实验室 Pilot Plant实验车间 Plant车间 20 to 5000 L fermentor ＞5M3 fermentor 活化 一级种子 二级种子 保藏的菌种 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐（一级种子）→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27℃,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（ 27℃,10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌、放线菌快，通常用一级种子 二级种子罐 一级种子罐 一、理想种子的质量标准 接种龄与接种量 种龄：是指种子在罐中培养的的培养时间。 通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。 不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定。嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。 接种量：是指移入的液体种体积和接种后培养液体积的比例。固体种重量与总发酵基重量的比 接种量的大小决定于生产菌种在发酵