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(一)单纯固定液 甲醛: 1.浓度: 40%,气体 2. 渗透力强,固定均匀,组织收缩小, 3. 不能使白蛋白和核蛋白沉淀 4. 保存脂类,必须用冷冻切片。是糖的保护剂 5.可固定高尔基体,线粒体 重铬酸钾 浓度: 1%-3%水溶液, 有毒,橘红色结晶 穿透速度快,几乎不收缩,经乙醇脱水后明显收缩, 未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀,但可使蛋白质变为脂溶剂。酸化后可使蛋白质沉淀,此时染色体可被保存,但线粒体破坏。 固定高尔基体和线粒体有良好效果。 酸性染料着色好,碱性染料着色差 固定的组织需经流水冲洗 12-24h ,或用亚硫酸盐洗涤。 苦味酸 黄色结晶体,是一种强酸,易燃易爆,配成饱和溶液储藏 穿透慢,组织收缩明显,无明显硬化 。 能沉淀一切蛋白质 4.对脂肪和类脂无固定作用 。 可软化皮肤和火棉胶 ,不宜用火棉胶包埋 固定时间不宜超过 24h, 固定的组织应尽快放入 70%乙醇,滴加饱和碳酸锂或浓氨水,有助于除去苦味酸固定产生的黄色。 升汞 浓度为 5%-7%的水溶液,针状结晶 2.穿透力低,只宜固定薄片组织,单独应用组织收缩明显 3, 对蛋白质有固定作用, 对类脂和糖类无固定作用 临用时加冰醋酸 醋酸 刺激性气味的无色液体,低于 15℃为冰醋酸 5%的醋酸 PH为 2-8 ,可抑制细菌和酶的活性,可防止自溶。 穿透力强 不能沉淀白蛋白,球蛋白,但能沉淀核蛋白 不能固定脂肪和内酯,不能保存糖 . 固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸,可较好的保存染色体 6, 缺点是组织膨胀明显,尤其对于胶原纤维和纤维蛋白 铬酸 为三氧化铬的水溶液,浓度 %-1%,强氧化剂,不能与乙醇,甲醛等混合 穿透力弱,一般组织需固定 12-24h ,固定的组织有收缩, 能沉淀蛋白质,核蛋白固定良好。 对脂肪无固定作用 固定线粒体和高尔基复合体 宜避光保存,以防蛋白质溶解。 必须彻底流水冲洗(≥ 24h)。 锇酸(四氧化锇) 淡黄色结晶, 剧毒,浓度 1%-2%,强氧化剂,不能与乙醇,甲醛等混合 渗透力极弱,易使组织变硬, 延长固定时间, 组织的脆性增加, 对染色不利 。 固定均匀,不沉淀蛋白质。 4.为脂类固定剂 适用于线粒体和内质网的固定 为电镜研究的必须固定剂。 固定目的不同,配方和浓度根据需要改变 固定后对碱性染料亲和力强,细胞核的染色效果好 应在临用前前几天配制以保证充分溶解。 丙酮 1.易挥发,易燃的无色液体,可与水,醇,氯仿,醚混合 渗透力强,对核的固定差 可使蛋白质沉淀 作用基本与乙醇相同,但对糖原无固定作用5.广泛用于酶组织化学中各种酶的固定 乙醇 无色液体,,还原剂,可与水无限相溶,有固定兼脱水作用用于固定的浓度为 80%-95% 2.渗透力弱,固定速度较慢,易使组织变脆,无水乙醇固定时,穿透速度快,渗透力差,使组织收缩 ,能沉淀白蛋白,球蛋白,核蛋白 用于糖原的固定 50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体, 并可溶解血红蛋白, 对其他色素也有破坏。 三氯醋酸 为无色易潮解的结晶体,水溶液为强酸性,易溶于醇和醚,应密封保存 也是一种良好的脱钙剂 (二)混合固定液 B-5 固定液(醋酸钠 - 升汞 - 甲醛) .多用于固定淋巴组织, 染色前应进行脱汞处理 配方:无水醋酸钠,升汞 6g,甲醛 10ml,蒸馏水 90ml. Bouin 液 有一定毒性 ,应避免吸入或与皮肤接触 固定液偏酸,对抗原有一定损害,使组织收缩, 不适宜标本的长期保存 固定效果好,组织细胞结构完整。 细胞核着色鲜明,细胞质着色较差。 对脂肪固定效果好,尤适用于含脂肪的淋巴结,乳腺组织和脂肪瘤标本 适用于结缔组织染色,尤其是三色染色更为理想 。 配方:饱和苦味酸水溶液:甲醛水溶液:冰醋酸 =15:5: : 1 Carnoy 液 1.有防止乙醇的硬化和收缩作用,增加渗透力,外膜致密的组织可用其固定 固定速度快, 3mm厚组织块 1h 内即可固定,大块组织不超过 4h。3,固定细胞质和细胞核,对于 染色体固定佳 ,显示 DNA,RNA效果好 。 常用于糖原和尼氏体的固定 5.不能保存脂类,不适用脂肪染色。 配方:冰醋酸 10ml,氯仿 30ml,无水乙醇 60ml Muller 液 作用缓慢,固定均匀,组织收缩小 多用于媒染和硬化神经组织 固定过程中,需常更换新鲜的液体 配方:重铬酸钾,硫酸钠,蒸馏水 100ml Orth 液 渗透力强,组织收缩小 应临时配置,在暗处固定 ,固定 24h 左右,固定液变为黑色时不可用,固定后流水冲洗 12-24h。 固定胚胎组织,神经组织。脂肪组织 配方:重铬酸钾,硫酸钠,蒸馏水 100ml,37%-40%的甲醛 10ml(用时加入) PFG液 适用于多种肽类抗原的固定,多用于免疫电镜研究 对

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