0502薄层色谱法（整理）.doc

PAGE PAGE 1 0502薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器 内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适 宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫 描仪进行扫描，用于鉴别、检査或含量测定。 1.仪器与材料 (11薄层板按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝 板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤 维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可 加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶 GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合 剂。F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。按 固定相粒径大小分为普通薄层板（10?4(^m)和髙g薄层板 (5?10pm)0 ^保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和 化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固 定相颗粒大小一般要求粒径为10?40pm。玻板应光滑、平 整，洗净后不附水珠。 (2)点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全 自动点样器材。、 (3展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专 用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的 水平展开槽。 (釣显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾 器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色 可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可 用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 (5)检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光 光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像 用。暗箱内光源应有足够的光照度《 (6)薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上 有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫 描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分 析仪器。 2.操作方法 (1)薄层板制备 市售薄层提临用前一般应在110°C活化30分钟。聚 ■■■■ _IM_I -—* 酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板、塑料薄层板可根据需要 剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的固定相层不得有破 损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氣甲 烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，晾 干，110X：活化，置干燥器中备用。 自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水 (或加有黏合剂的水溶液，如0.2%?0.5%羟甲基纤维素钠 水溶液，或为规定浓度的改性剂溶液）在研钵中按同一方向 研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平 稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2?0.3mm)，取下涂好 薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110C烘30 分钟，随即置于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均 匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光 滑，并且无麻点、无气泡、无破损及污染。 2)点样除另有规定外，在洁净干燥的环境中，用专 用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，色样基线距?底,边10? 15mm,高效板一般基线离底边8?lOmnu圆点状直径一般 不大于4mm，高效板一般不大于2mm。接触点样时注意勿 损伤薄层表面。条带状宽度一般为5?10mm，高效板条带 宽度一般为4?8mm,可用专用半自动或自动点样器械喷雾 法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为 宜，一般不少于8mm，高效板供试品间隔不少于5mm。 {3展开将点好供试品的薄层板放人展开缸中，浸人 展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭。除另有规定外， 一般上行展开8?15cm，髙效薄层板上行展开5?8cm。溶 剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，待检测。 展开前如需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加人适量 5的展开剂，密闭，一般保持15?30分钟。溶剂蒸气预平衡 后，应迅速放人载有供试品的薄层板，立即密闭，展开。如 需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则须在展开缸的内壁 贴与展开缸高、宽同样大小的滤纸，一端浸人展开剂中，密 闭一定时间，使溶剂蒸气达到饱和再如法展开。 必要时，可进行二次展开或双向展开，进行第二次展开 前，应使薄层板残留的展开剂完全挥干。 (4)显色与检视有颜色的物质可在可见光下直接检视， 无色物质可用喷雾法或浸溃法以适宜的显色剂显色，或加热 显色，在可见光下检视。有荧光的物质或显色后可激发产生 荧光的物质可在紫外光灯（365nm或254nm)下观察荧光斑 点。对于在紫外光下有吸收的成分，可用带有荧光剂的薄层 板（如硅胶GF254板），在紫外光灯（254nm)下观察荧光板面 上的荧光物质淬灭形成的斑点。 (5)记录薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄，以 光学照片或电子图像的形式保存。也可用薄层色谱扫描仪扫 描或其他适宜的方式