间接免疫荧光法.docVIP

活细胞间接免疫荧光法 1 转染细胞4h后，用PBST洗涤三次。 2 固定。用置于-20℃预冷的甲醇进行固定，500 ul/孔，室温作用10 min。用PBST洗涤三次。 3 封闭 4 一抗 加入1：100倍稀释的阳性血清（用1%的BSA稀释） 200 ul/孔，37℃作用1h。用PBST洗三次 5 二抗加入1：500稀释的Alexa fluor 488标记的羊抗鸡IgY(用1%的BSA稀释)，200uL/孔，37℃作用lh。用PBST洗涤三次。 6 荧光显微镜下观察结果。 转染Vero 细胞4h后，用PBST洗涤三次，用置于-20℃保存的冷丙酮(丙酮：乙醇=2：3)进行固定，500uL/孔，室温作用10min。用PBST洗涤三次，加入1：100倍稀释的ARV阳性血清200uL/孔，37℃作用lh。用PBST洗涤三次，加入1：500稀释的Alexa fluor 488标记的羊抗鸡IgY，200uL/孔，37℃作用lh。用PBST洗涤三次 一．实验器材： 1． 器材： 40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等。 2． 试剂： 单抗隆抗体（单抗）、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS（pH7.2-7.4）、甘油、叠氮钠（NaN3）等。 二．方法（微量法） 1． 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次，1000rpm每次10分钟。用含0.1% NaN3PBS调细胞浓度