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实验四甘油三酯测定(范玉平) 测量误差:是测量结果减真值之差。 误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。 不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。 生化分析相关概念 正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x), 生化分析相关概念 精密度：表示测量结果中的随机误差大小的程度，即指在一定条件下进行多次测定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。 生化分析相关概念 实验方法分类 ①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method） ①决定性方法（definitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接近。由于技术要求太高，费用昂贵， 用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用于常规工作 ) ②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。 用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂盒等。 ( 有条件实验室可用于常规工作 ) ③常规方法（routine method）有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。 　　用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。 　　例如： TG 定量 　　决定性方法——同位素稀释/质谱（ID/GC/MS） 　　参考方法——酶法 　　常规方法——酶法 实验方法选择原则 ①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。 ②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。 血清三酰甘油测定 实验四 实验目的: 1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理和意义． 2.了解三酰甘油的正常值范围. 一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视 。 TG的生物化学 TG的生物化学 二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。 除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋白（RLP） TG的代谢 外源性途径 内源性途径 外源性途径： 指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再合成TG并与其他脂质形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。 内源性途径： CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收，其衍生物和一些新组分合成VLDL。 TG测定的方法学 化学法 色谱法 酶法 化学法 化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不能自动化，而不适于常规工作应用。 化学法 1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-变色酸法） 比较准确 2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低 基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色 色谱法 核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。 酶法 1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽 2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定 3.甘油氧化酶法 磷酸甘油氧化酶法实验原理: TG + H2O 甘油+FFA 甘油-3-磷酸+ADP LPL GK 甘油+ATP 甘油-3-磷酸+O2 GPO 磷酸二羟丙酮+H2O2 H2O2+4-AAP+DHBS POD 醌亚胺+ H2O 实验操作(手工分析）: 加入物 空