《放射免疫技术》.pptVIP

二、方法与类型 （一）单位点 IRMA （二）双位点 IRMA 三、关键技术 抗原抗体反应 分离技术 放射性测定 数据处理 Ab* Ag Ab (待检Ag) （一）抗原抗体反应 固相抗原抗体复合物 * 牢固的抗原抗体复合物 固相吸附分离技术 （二）分离技术 一般采用物理吸附法：用碳酸盐缓冲液将预包被抗体稀释到3μg/ml~10μg/ml，室温过夜，弃包被缓冲液（含有未结合物质和过剩标记物），并洗涤去掉结合不牢固抗体，从而达到分离的目的；然后，再加入1%牛血清白蛋白溶液，封闭、保存备用。 晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm) 参数 cpm B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%) 注：T即是B与F的总和 （三）数据处理 ?IRMA的优点 ?效率高、操作简便 ?灵敏度高 ?特异型强 ?稳定性好 四、评价与应用 ?IRMA的缺点 ?抗体用量较多 ?抗体的纯化较难 RMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇的肽类或蛋白质。抗体适用于大分子蛋白质和多肽类激素的检测分析，如肿瘤标志物CA15-3，人血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH、凝血因子、降钙素、HBsAg等，某些难以标记的病毒抗原也可通过IRMA进行检测。 小 结 ?放射免疫技术是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定的一种技术。有两种类型经典的放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）。 ?放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞争性结合限量的抗体;免疫放射分析是将放射性物质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。 ?放射性免疫技术灵敏度高、特异性强，常用于微量物质的定量测定。但由于放射性核素的放射性对人体和环境会产生一定的危害和污染，因此操作时必须加以注意。 放射免疫技术 第十九章 放射免疫技术 放射免疫技术的基本概念及类型 放射标记物的鉴定与纯化。 RIA和IRMA的测定原理及关键技术。 RIA和IRMA的临床应用与评价 本章要点 目　录 放射性核素和放射性标记物的制备 1 放射免疫分析性 2 免疫放射分析 3 放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。 前 言 第一节 放射性核素和放射性标记物的制备 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物，选择何种放射性核素以及如何制备放射标记物（将放射性核素与抗原或抗体连接），是建立放射免疫技术的基础。 一、放射性核素的基本知识 基本概念　 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种 放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时 释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 基本类型 依据其衰变方式 α衰变、β衰变、γ衰变 最常用的放射性核素是125I 125I的优点 化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得 高比活性的标记物； 在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高； 半衰期适中（60天左右），且废弃物较容易处理。 125I的缺点 用125I取代H，可能使原物质免疫活性受到影响； 易因发生辐射损伤而使标记抗原变性； 作为商品化试剂的产品货架期较短。 放射性核素放射活性的检测 利用射线照射闪烁体（NaI晶体），导致晶体分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换成光电子并放大107倍；从光电倍增管输出的电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处理，并在定标器上显示。 二、放射性核素标记抗原抗体方法 主要包括 间接标记法 直接标记法（氯胺T法） 125I- 125I或125I+ 125I-标记物 （混合物） Ch-T、LPO氧化 取代反应 （一）直接标记法——氯胺T法（Ch-T） 氯胺T将125I的I－氧化为I+，I+取代蛋白质酪氨酸苯环的氢，形成稳定的放射标记物（二碘酪氨酸），最后加入偏重亚硫酸钠（还原剂）终止反应。 使用无还原剂的高比放射性碘源 被标记物用量要少 Ch-T用量要低 控制总反应体积200μl 反应时间1分钟~2分钟 弱碱性反应条件 （二）间接标记法 预先将125I用Ch-T法标记琥珀酰胺酯，制成的125I 化脂功能基团可与蛋白分子上的氨基酸残基反应，从而使待标记物被碘化。 三、放射标记物的