《苯硫脲尝味遗传大实验》.pptVIP

4.5.2. 试剂和材料 （1）材料：受试者PTC 基因PCR 产物 （2）试剂：Tris 碱，冰乙酸，Na2EDTA.2H2 O,溴化乙锭，琼脂糖，Marker I 4.5.3. 溶液配制 （1）50× TAE 电泳缓冲液（储存液，pH约8.5）：Tris 碱 242g，57.1ml 冰乙酸，37.2g Na2 EDTA.2H2 O ，去离子水定容至1L （2）1× TAE 电泳缓冲液（工作液）：取50×TAE 电泳缓冲液，去离子水稀释50倍 (3）0.5mg/ml 溴化乙锭（EB）（1000? 储存液）：50mg 溴化乙锭溶于100mL dd water，4?C 避光储存）。 (4) 溴化乙锭（EB）工作液：0.5mg/ml EB（1000? 储存液），去离子水稀释 1000倍。（注：EB为扁平分子，可以嵌入DNA，为潜在诱变剂，接触时须带一次性医用无菌PE手套，但也不是洪水猛兽，不小心溅到皮肤上时，不会被皮肤吸收只是停留在表面，用大量流水冲洗即可）。 （1）配制 1.2%琼脂糖凝胶：称取 0.6g 琼脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml 1 × TAE电泳缓冲液，放入微波炉中加热，并不断取出混匀，注意观察烧瓶中的琼脂糖粉末，直至完全熔解（烫，戴手套）。50ml 正好倒一块大胶（切不可让胶溶液溢出到微波炉中！）。（2）将胶液置桌面上室温冷却致热但不烫手（约50-60℃）。  4.5.2 实验方法 （3 ）把梳子插到凝胶灌制模具的正确位置后缓缓倒入胶溶液。胶溶液倒至与模具的矮边缘相平即可。在桌面上静置10-20 分钟待胶完全凝固.（剩下的胶溶液封口后留待以后再熔化使用），小心拔出梳子，凝胶没入电泳槽电泳液中，凝胶上有样品孔的一侧要朝向电泳槽的负极。  （4）取 1 片光面纸，点 5uL 灭菌水、2uL 6× 加样缓冲液，再加入 5uL PCR 产物制成10uL DNA 样品。 （5）在凝胶上选择相邻的加样孔。用10ul 的吸液头 分别依次加入5uL Marker I 对照，各小组12uL PCR 产物电泳样品（互相比较） （6）根据电泳槽的长度把电泳仪的电压调至120V (10V/cm)，电泳20~30min。（注意正负电极的位置连 接正确）。 （7）把凝胶小心放入盛有 EB的搪瓷盘中，染色 10分钟 后，取出用自来水浸泡10min 。 （8）放入凝胶成像系统中拍照。 4.6.1 实验材料 主要仪器设备 高压蒸气灭菌锅、高速离心机、小型瞬时离心机、涡旋振荡器、磁力搅拌器、恒温水浴锅、恒温干热议、制冰机、紫外分光光度计、微量移液器、冰箱、-80℃超低温冰箱。 洁净、经121℃高压灭菌20min 的1.5 mL 灭菌微量离心管、微量移液器吸头（枪头），离心管架，一次性医用无菌PE 手套，塑料饭盒，记号笔。 4.6 PTC 基因PCR 产物酶切 试剂和材料 （1）材料：受试者PTC 基因PCR 产物 （2）试剂：限制性内切酶Fnu4H1 4.6.2 实验方法 （1） 提前2 h 将恒温水浴锅或恒温干热仪(或恒温水浴锅)电源打开，调节工作温度稳定至37 °C。 （2）从制冰机中盛取碎冰（0°C ），从冰箱中取出所需试剂，在碎冰中解冻 （3）将试剂在涡旋振荡器上涡旋振荡混匀10 s （4）瞬时离心10 s。 （5） 取1?L 受试者 PTC 基因纯化DNA，用紫外分光光度计测定其260nm、280nm 下的紫外吸光光度值，进行DNA 定量分析。 （6）在碎冰上按照配方和顺序在1.5 mL 微量离心管中配制酶切缓冲液（为保持酶活性及DNA 切割效率，始终在低温下配制）： 灭菌超纯水 补足15?L 10×酶切缓冲液 1.5?L 5 units/?L Fnu4H1 1?L PTC 基因纯化DNA 1?g （根据DNA 定量结果加入适当体积溶液） 总体积 15?L （7）37°C 恒温酶切过夜 （8）酶切产物4?C 保存备用 苯硫脲尝味遗传大实验 遗传学大实验注意事项 1．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询。 2．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。 3．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地投弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。 4.实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验室。 1.实验目的 （1）测定人群中PTC 尝味基因的表现型和基因型，理解孟德尔遗传基因型与表现型的对应关系。 （2）了解酶切扩增多