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重组胰岛素知识 * 前言: 胰岛素的发现 胰岛素的结构 重组人胰岛素及类型 重组人胰岛素基因工程菌的构建: Construction of the ecotin(大肠杆菌素)–proinsulin expression plasmid Construction of pEGP1 plasmid * 胰岛素的发现 1922 Frederick Banting Charles Best [1]. Simon Heller , Plamen Kozlovski , Peter Kurtzhals Diabetes Research and Clinical Practice 78 (2007) 149–158 [1] [1] * 人胰岛素一级结构 CHAIN A: 21 amino acids CHAIN B: 30 amino acids * 胰岛素立体结构 * 1.Humulin (优泌林) 重组人胰岛素 2.Novolin (诺和灵) 1982年10月在美国上市,全球第一 个商业化基因重组人胰岛素。 Eli Lilly and Company Novo Nordisk * 欧洲市场的重组胰岛素类似物 Simon Heller , Plamen Kozlovski , Peter Kurtzhals Diabetes Research and Clinical Practice 78 (2007) 149–158 * 重组人胰岛素类型 1.重组前胰岛素 Chain B Chain C Chain A 2.A,B链分开表达 + Chain B Chain A 冯佑民 张友尚 生物工程进展 1998, Vol.16, No. 4 * 3.B-miniC-A 重组表达 Chain B Chain A Mini Chain C 4.B-XXX-A 重组表达 X为氨基酸 Chain B Chain A X1X2Xn N≤3 冯佑民 张友尚 生物工程进展 1998, Vol.16, No. 4 * 重组人胰岛素基因工程菌的构建 重组前胰岛素 Chain B Chain C Chain A * Materials 1.Restriction enzymes from NEB and MBI Fermentas 2.PCR purification and gel extraction kits from Qiagen 3.pCR-Blunt II-TOPO kit and from Invitrogen Top10 competent cells 4.E. Coli BL21(DE3)Gold from Stratagene 5.E. coli GM2163 (dam- and dcm- ) from NEB 6.E. Coli SF120 from Prof. George Georgiou’s laboratory 7.Bovine trypsinogen and thrombin from Sigma 8.HisTrap FF crude and from Amersham HiTrap NHS-activated HP columns 9. Antibodies used for ELISA from Roche 10.
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