_有机高分子基质的HPLC填料.ppt

2. 聚合物基质的高效离子交换色谱填料 ① 交联共聚的苯乙烯 - 二乙烯苯 ② 聚甲基丙烯酸酯 ; ③ 4- 乙烯吡啶共聚物 特点 ：高交联大孔结构 , 良好的刚性 和小而均匀的粒度 a. 多孔树脂的 IEC 填料 : 柱效、穿透性、分离度、负载量、回收率的性能优异 ? Mono Beads 系列：包括 Mono Q, Mono S, Mono P ? SOURCE 系列 :15Q,15S,30Q,30S ? 贯流色谱填料 POROS 系列 ? 羟基化聚醚凝胶：如 TSK gel DEAE-5PW,SP- 5PW,CM-5PW 等 ? 交联聚甲基丙烯酸羟基乙酯 : 亲水 , 大孔 第十章 有机高分子基质的高效液 相色谱分离柱填料 首先回顾几个问题 ? HPLC 方法的主要特点有那些？ ? HPLC 的主要设备分哪几部分？ HPLC 方法的主要特点 ? 分离效率高，选择性好，适于各种多元组 分复杂化合物的分离 ; ? 应用范围广：无机物—有机物，天然物质 —合成产物，小分子 --- 大分子，一般化合 物到生物活性物质 ; ? 分离机理各异，色谱柱、淋洗体系和操作 参数选择广泛 ; ? 分离纯化 + 分析检测 ; ? 样品量从痕量到大规模制备，实现在线监 测和自动化操作。 HPLC 的关键设备 ① 专用的高压输液系统 ; ② 高灵敏检测系统 ; ③ 高效分离柱 ? 其中分离柱是色谱的中心 , 是最为关键的部分 色谱法 固定相粒度 柱长及内径 采用压力 分析速度 经典 大于 100 μ m 10-100cm φ 2-5cm 常压 几十小时 高效 5 － 10 μ m 10-30cm φ 1-5mm 10 7 Pa 几分钟 与经典色谱的比较 HPLC 分离填料： 有机基质 多糖型凝胶 高聚物树脂 无机基质 硅胶 氧化锆 氧化铝 多孔玻璃 羟基磷灰石 石墨化碳黑 ? 基质微球——天然多 糖或合成单体或交联剂 ? 负载样品的能力强， 色谱容量高 ? 耐酸碱、具化学稳定 性，柱寿命长，易再生 ? 不易产生非特异性吸 附作用 一、 HPLC 色谱柱的关键在于填料 ? 物理结构→色谱动力学 （粒度与粒度分布、孔径与孔径分布、颗 粒强度和表观形态→柱效率、穿透性） ? 化学结构→色谱热力学 （连接在基质上的官能团或链段→样品保 留值、选择性） 1 、 HPLC 色谱柱填料在物理结构上的要求 : ① 颗粒大小合适，粒度分布较窄 ; ② 颗粒强度适应高速高压操作 ; ③ 多孔型的填料孔径大小和孔径分布适宜 , 避 免复杂的微孔结构 ; ④ 一定的溶胀及收缩水平。 常见的液相色谱填料类型 多孔型 非多孔型 薄壳型 分：小孔（ 10nm ）、中 孔（ 10-30nm ）、大孔 （ 30nm ）和超大孔 （ 100nm ），应用占主 导地位 整体颗粒无孔 颗粒表面层多 孔，内部无孔。 以合成树脂为基质的产 品，颗粒在 10 μ m 左右 以合成树脂为基 质的产品，颗粒 7 μ m 以多糖凝胶为基质的产 品，颗粒都 20 μ m 左右 同左 目前的主要发展方向 ( 研究热点 ): ① 颗粒单分散的填料 ; ② 贯穿性超大孔结构的填料 ; ③ 小颗粒的非多孔填料。 2 、 HPLC 色谱柱填料在化学结构上的要求 ① 特定的选择性 ; ② 良好的化学稳定性及热稳定性 ; ③ 避免不可逆吸附。 不同填料的化学结构是通过对基质材料的 化学改性而实现的。 ? 离子交换色谱填料 颗粒表面携带季铵基、 DEAE 基、磺酸基、羧基等强 弱阴阳离子集团。 ? 反相色谱填料 C18 、 C8 烷基等疏水性集团 ? 正相色谱填料 羟基、氨基、氰基等弱疏水性集团 ? 亲和色谱填料 蛋白质、抗体、激素、抗菌素、酶等具有生物特异 性的配基 二、有机高分子类型的 HPLC 填料基质树脂 基质材料决定填料物理结构和化学结构 : 颗粒大小与分布 , 颗粒强度 , 孔径大小 , 孔结构 形态 , 颗粒内部的化学结构及其稳定性 , 直接影响 对颗粒的表面 ( 包括内孔表面 ) 的化学修饰 。 可分为 : 多糖型 聚合物型 （一）多糖型基质材料 1. 葡聚糖系 : ① 高交联的羟丙基化葡聚糖 , 其颗粒刚性好 , 粒度 小而且分布范围窄（ 10 ~ 23 μ m ） ; Sephasorb HP Uitrafine 用于中低压色谱和高效色谱 ② 烯丙基葡聚糖与 N,N`- 亚甲基双丙烯酰胺交联共 聚而成的凝胶。 Sephacryl 系列 (S-100HR,S-200HR,S-300HR) 属 于高效凝胶，较高流速下使用 2. 琼脂糖系 : ① Sepharose 与 2,3- 二溴丙醇反应生成琼脂糖凝胶 Sepharose CL