miR-155在树突状细胞抗白念珠菌固有免疫应答中的调节作用及其机制研究.docxVIP

miR-155 在树突状细胞抗白念珠菌固有免疫应答中的调节作用 及其机制研究 白念珠菌 (Candida albicans,C.albicans) 作为一类条件致病菌 , 主要寄居 在人体的皮肤和粘膜 ( 如口腔、消化道和阴道 ) 表面。在机体免疫功能正常时 , 白 念珠菌与免疫系统维持相对稳态 , 不会引发感染 ; 而当机体的免疫功能受到抑制 时 , 白念珠菌与机体共存的稳态被打破 , 白念珠菌迅速繁殖 , 由共生菌转为致病菌。 白念珠菌感染作为最常见的真菌感染 , 可有不同的临床表现 , 轻者常引发局 部粘膜损伤 , 重者可穿透组织、侵入外周血液循环 , 表现为播散性念珠菌病 , 严重 威胁患者生命。近些年来 , 由于抗生素滥用的现象仍未得到有效解决 , 且肿瘤放化 疗患者以及 HIV 感染病人的日益增多 , 导致白念珠菌感染的发病率不断增高 , 而 且播散性感染的病死率居高不下 , 这些至今仍是难以解决的临床问题。 因此 , 研究白念珠菌的致病机制、特别是深入研究机体免疫系统抗白念珠菌 感染的调控过程 , 可为其相关的感染性疾病的治疗提供帮助。机体抵抗白念珠菌 感染的第一道防线是由树突状细胞 (dendritic cells,DCs) 、中性粒细胞、巨噬 细胞等组成的固有免疫应答系统。 该系统可以在第一时间通过非特异杀伤的方式清除致病菌 , 但持续时间不长 而且不具备免疫记忆功能。 DCs作为专职的抗原递呈细胞 (antigen presenting cells,APCs), 其表面表达较高水平的模式识别受体 (pattern recognition receptors,PRRs) 。 这些 PRRs的主要生物学功能在于可以识别病原体表面的保守结构 , 即病原 体相关分子模式 (pathogen-associated molecular patterns,PAMPs), 并由此开 启针对病原体感染的免疫应答。 白念珠菌细胞壁的 PAMPs一旦被 DCs表面的 PRRs 识别 , 可迅速活化 DCs,分泌多种炎症因子和趋化因子 , 促进对白念珠菌的非特异 性免疫清除。 DCs的活化机制十分复杂 , 其核心事件是 NF-κB、核转录因子激活蛋白 -1(nuclear transcription factor activation protein-1,AP-1) 等转录因子的 核转位 , 最终调节多种细胞因子和趋化因子的表达。另一方面 ,DCs 还可以通过 PRRs吞噬病原体 , 并将病原体抗原加工、 递呈给 T 细胞 , 诱导 T 细胞分化 , 指导后 续的特异性免疫应答的类型和持续时间。 固有免疫是获得性免疫的起点和驱动 , 而获得性免疫可在固有免疫的基础上 发挥更持久且具有记忆功能的免疫效应。值得注意的是 , 机体抗白念珠菌的免疫 应答过程需要多种机制的精细调控 , 若免疫反应强度过弱 , 则无法有效清除病原 体 ; 但若免疫应答强度过高或持续时间太长 , 则容易导致机体组织的炎症性损伤。 microRNAs(miRNAs)是一类长度约 20 个碱基左右的单链非编码 RNA,可以与 靶基因 mRNA的 3’非编码区 (3 ’UTR)的碱基不完全互补结合 , 导致 mRNA发生降 解 , 或者直接抑制 mRNA的蛋白质翻译过程 , 从而发挥转录后水平的调节作用。 miRNAs的作用特点是一个 miRNA可以同时在转录后水平对多个基因进行调节 , 而 一个基因的表达强度也可以受到多个 miRNAs的调节 ,miRNAs对靶基因的调节具 有明显的时空特异性。 近些年来 , 越来越多的研究表明 ,miRNAs在免疫细胞的发育和免疫应答的进 程中发挥不可忽视的调控作用。 在前期的研究中 , 我们采用 microRNA芯片分析了 白念珠菌刺激单核源 DCs内 miRNAs的表达谱变化 , 结果发现多种 miRNAs异常表 达 , 其中 miR-155 表达显著上调。 再者 , 以往的研究表明 miR-155 在抗细菌、病毒的免疫反应中具有活跃的调 节功能 , 但目前 miR-155 在真菌感染免疫中的生物学功能尚不明确。基于以上研 究背景 , 本课题探讨了 miR-155 在树突状细胞抗白念珠菌感染的固有免疫应答中 的调节作用及其作用机制。 第一部分热灭活的白念珠菌对树突状细胞及 CD4~+Th细胞的活化作用及功 能影响目的 : 研究白念珠菌感染对树突状细胞的成熟及其功能的影响 , 进而对 CD4~+Th细胞的活化和分化的影响。方法 : 采用磁珠分选的方法从人外周血中分 CD14~+单核细胞和 CD4~+Th细胞 , 加入 GM-CSF和 IL-4 诱导 CD14~+单核细胞分化为未成熟的 DCs。 用热