_DNA的重组与转座.ppt

目 录 在其 游离端 ，使 DNA 双链 解旋并降解 ，解 旋所需能量由 ATP 水解供给。及至酶移动 到 chi 位点(5′GCTGGTGG3′)，在其3′侧 4 ～ 6 个核苷酸处将链 切开 ，产生具有3′ 末端的 游离 单链。随后单链可参与重组各 步骤。大肠杆菌基因组共有 1009 个 chi 位 点，分布在 DNA 各部位，平均 5kb 有一个， 目 录 由于 DNA 分子具有螺旋结构，在持续进 行链的交换时需要两 DNA 分子发生旋转。 RecA 能够介导 单链绕入 另一 DNA 分子，并 水解 ATP 。一旦 Holliday 中间体形成 ，即 由 RuvA 和 RuvB 蛋白促进 异源双链 的形成。 RuvA 蛋白能够识别 Holliday 联结体 (junction) 的 交叉点 ， RuvA 四聚体结合其 上形成四方平面的构象，使得分支点易于 移动， RuvA 还帮助 RuvB 六聚体环结合在双 链 DNA 上，位于交叉点 上游 。 目 录 RuvB 是一种 解螺旋酶 ，通过水解 ATP 而推 动 分支移动 ( 图 4-4) 。 RuvAB 复合物的移动 速度约为 10 ～ 20 bp/s 。同源重组最后由 RuvC 将 Holliday 联结体 切开 ，并由 DNA 聚 合酶和 DNA 连接酶 进行 修复合成 。 RuvC 是一种 核酸内切酶 ，特异识别 Holliday 联结体并将其切开。它识别不对 称的四核苷酸 ATTG ，此序列因而成为 切开 Holliday 联结体的热点 ，并决定 目 录 图 6-4 Ruv AB 复合物结合于 H olliday 联结体的模型 目 录 结果是 片段重组 还是 拼接重组 ，即异源双 链区两侧来自 同一分子 还是 不同分子 。 相当于原核生物中与重组有关酶的对应物 也已在 真核生物 中发现。在酿酒酵母中的 rad51 基因与大肠杆菌 recA 基因同源，二 者的功能有关。该基因突变造成双链断裂 积累，并且无法形成正常的联会复合物， 但此蛋白质不能在体外与单链 DNA 形成纤 丝，表明原核生物与真核生物的同源重组 机制可能 有所不同 目 录 二、 特异位点重组 特异位点重组 广泛存在于各类细胞中 ，起 着 十分特殊 的作用，彼此有很大的不同。 它们的作用包括某些 基因表达的调节 ， 发育过程中程序性 DNA 重排 ，以及有些 病 毒和质粒 DNA 复制循环过程中发生的整合 与切除等 。此过程往往发生在一个 特定 的短的 (20 ～ 200 bp)DNA 序列内 ( 重组位 点 ) ，并且有 特异的酶 ( 重组酶 ) 和 辅助 目 录 因子 对其 识别和作用 。特异位点重组的 结 果 决定于重组位点的 位置和方向 。如果重 组位点以 相反方向 存在于同一 DNA 分子上， 重组结果发生 倒位 。重组位点以 相同方向 存在于同一 DNA 分子上，重组发生 切除 ； 在不同分子上，重组发生 整合 。 目 录 特异位点重组的结果依赖于重组位点的位置和方向重组位点以白箭头表示。 A 重组位点反方向位于同一 DNA 分子，重组结果发生倒位。 B 重组位点同 方向位于同一 DNA 分子，重组发生切除；位于不同分子，重组发生整合 目 录 位点专一性重组最早是在 λ噬菌体 的遗 传学研究中发现的。λDNA通过 重组 整合 到大肠杆菌染色体的 专一性位点上 ，转变 成为 原噬菌体 DNA 的非活性状态 。一般位 点专一性重组都具有λ整合作用的 两个基 本特征 ： ①交换是相互的和保存原先的 DNA ， 是 典 型 的 保 守 性 重 组 （ conservative recombination ） ； ②它 发生在噬菌体和细菌 DNA 短同源序列 目 录 中的专一性核苷酸上， 在高等生物细胞中， 最重要的例子是通过 一组前体序列的位点 专一性重排 构建 多种多样的专一 抗体基因 。 本节简要介绍噬菌体 DNA 的整合与切除。 目 录 λ噬菌体的整合与切除 λ噬菌体侵入大肠杆菌细胞后，面临着 裂解生长 还是 溶源生长 两种生活型的选择， 其 DNA 在不同生活型之间的转换包括 两种 状态 ： 进入溶源状态需要λDNA整合 （ integrate ）进宿主 DNA ，噬菌体 DNA 是 细菌染色体的整合部分； 由溶源状态进入 裂解状态需要λDNA从宿主 DNA 上切除 （ excise ）下来， λDNA在宿主细菌中 目 录 以 环状分子独立存在 。这