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第十三章 细胞增殖及其调控
什么是细胞周期?简述细胞周期各时相及其主要事件。
答:细胞周期 : 是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束后开始生长到下次有丝分裂终止所经历的全过程。
细胞周期各时相的生化事件:
①G1 期:DNA 合成启动相关, 开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、 RNA、碳水化合物、
脂等,但不合成 DNA;
②S 期: 开始合成 DNA 和组蛋白;在真核细胞中新和成的 DNA 立即与组蛋白结合,组成核
小体串珠结构;
③G2 期 :主要大量合成 ATP、 RNA 和蛋白质,包括微管蛋白和成熟促进因子等;
④M 期: 为细胞分裂期,一般包括前期,中期,后期,末期 4 个时期。
2 细胞通过什么机制将染色体排列到赤道板上? 有何生物学意义?
答:细胞将染色体排列到赤道板上的机制可以归纳为牵拉假说和外推假说。
①牵拉假说:染色体向赤道面方向运动, 是由于动粒微管牵拉的结果。 动力微管越长, 拉力
越大, 当来自两级的动粒微管拉力相等时, 即着丝粒微管形成的张力处于动态平衡时, 染色
体即被稳定在赤道面上;
②外推假说: 染色体向赤道方向移动, 是由于星体的排斥力将染色体外推的结果。 染色体距
离中心体越近, 星体对染色体的外推力越强, 当来自两极的推力达到平衡时, 推力驱动染色
体移到并稳定在赤道板上。
染色体排列到赤道板上具有重要的生物学意义, 染色体排列到赤道板后, Mad2 和 Bub1
消失,才能启动细胞分裂后期,并为染色体成功分开并且平均分配向两极移动做准备。
细胞周期有哪些主要检验点?各起何作用?答:细胞周期有以下主要检验点:
①G1/S 期检验点 :检验 DNA 是否损伤、能否启动 DNA 的复制,作用是仿制 DNA 损伤或是
突变的细胞进入 S期;
②S 期检验点:检验 DNA 复制是否完毕, DNA 复制完毕才能进入 G2 期;
G2/M 期检验点: DNA 是否损伤、能否开始分裂、细胞是否长到合适大小、环境是否利于
细胞分裂,作用是使得细胞有充足的时间将损伤的DNA 得以修复;
④中 -后期检验点:纺锤体组装的检验,作用是抑制着丝点没有正确连接到纺锤体上的染色体,确保纺锤体正确组装。
4、细胞周期时间是如何测定的 ?
答:测定细胞周期的方法很多, 有同位素标记法、 细胞计数法等, 其中标记有丝分裂百
分率法是常用的一种测定方法。
标记有丝分裂百分率法的原理是对测定细胞进行脉冲标记、 定时取材、 利用放射自显影
技术显示标记细胞,通过统计标记有丝分裂百分数的办法来测定细胞周期。
实验中常用的方法是 BrdU 渗入测定细胞周期的方法。 BrdU( 5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加
入培养基后, 可做为细胞 DNA 复制的原料, 经过两个细胞周期后, 细胞中两条单链均含 BrdU
DNA 将占 l/2 ,反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中
约一半为两条单体均浅染, 另一半为一深一浅。 细胞如果仅经历了一个周期, 则两条单体均深染。计算分裂相中各期比例,可算出细胞周期的值。
5、细胞周期同步化有哪些方法 ? 比较其优缺点 ?
答:①自然同步化:自然界存在的细胞周期同步化过程。
②人工同步化包括人工选择同步化和人工诱导同步化两种方法,比较如下:
方法分类
方法名称
优点
缺点
人工选择同步化
有丝分裂选择法
操作简单,细胞未经
分离的细胞数量少
任何药物处理,不受
药物伤害,细胞同步
化效率高
密度梯度离心法
方法简单省时,效率
对大多数种类的细胞
高,成本低
并不适用
人工诱导同步化
DNA 合成阻断法
同步化效率高,几乎
诱导过程可造成细胞
适合于所有体外培养
非均衡生长
的细胞体系
分裂中期阻断法
操作简便,效率高
所使用药物的毒性相
对较大
6、举例说明 CDK激酶在细胞周期中是如何执行调节功能的 ?
答:CDK激酶在细胞周期调控是正调控因子, 细胞周期各时相的有序更迭和整个细胞的
运行,都需要 CDK激酶的驱动,它是细胞沿周期运行的引擎蛋白。
以 MPF 为例阐述: MPF 是一种使多种底物磷酸化的蛋白激酶,即 CDK1 激酶,由 p34
蛋白和 cycling B 结合而成。 CDK1激酶活性首先依赖于 cycling B 含量的积累。 cycling B 一般在 G1 期的晚期开始合成,通过 S 期,其含量不断增加,达到 G2 期,其含量达到最大值,
CDK1激酶的活性随着周期蛋白 B 浓度变化而变化。 CDK1激酶的活化还受到激酶与磷酸酶的调节。活化的 CDK1激酶可使更多的 CDK1激酶活化。随着周期蛋白 B 含量达到一定程度,
CDK1激酶活性开始出现, 到
G2 晚期阶段,
CDK1激酶活性达到最大值并一直维持到
M 期的
中期阶段。 CDK
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