诺贝尔奖 绿色荧光蛋白.pptVIP

The Nobel Prize in Chemistry 2008 成果简介 钱永健名片 钱永健(Roger Yonchien Tsien，1952年2月1日－)，美国细胞生物学家。美国国家科学院院士，美国国家医学院院士，美国艺术与科学院院士。圣地牙哥加利福尼亚大学生物化学及化学系教授。汉族，1952年生于美国纽约，祖籍浙江杭州，是中国导弹之父钱学森的堂侄。 哈佛大学化学及物理学最优等学士学位英国剑桥大学生理学哲学博士学位 学术贡献 钱永健的学术贡献主要在于应用绿色萤光蛋白研究细胞信号通路，是这方面的公认先驱。 由于对绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)的发现、机理研究以及利用做出的贡献，瑞典皇家科学院诺贝尔将委员会将2008年度诺贝尔化学浆授予美国科学家下村修、马丁沙菲尔和美籍华裔化学家钱永健 化学奖评选委员会主席贡纳尔 冯 海伊内和评委莫恩斯 艾伦贝里对绿色荧光蛋白的评价指出，这是当代生物学的重要工具，借助这一“指路标”，科学家们已经研究出监控脑神经细胞生长过程的方法，这在以前是不可能实现的。他们说，下村修1962年在北美西海岸的水母中首次发现了一种在紫外线下发出绿色荧光的蛋白质，即GFP。随后，马丁沙尔菲在利用GFP做生物示踪分子方面做出了贡献；钱永健让科学界更全面地理解GFP的发光机理，对GFP坐了改造，通过改变其氨基酸排序合成出了能吸收、发射不同颜色（蓝色、蓝绿色、黄色）光的荧光蛋白，为同时追踪多种生物细胞变化的研究奠定了基础。 绿色荧光蛋白Green fluorescent protein(GFP) 从水母(Aequorea victoria)体内发现的发光蛋白。分子质量为26kDa，由238个氨基酸构成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团，是主要发光的位置。其发光团的形成不具物种专一性，发出荧光稳定，且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定，对多数宿主的生理无影响，是常用的报道基因。 GFP的发现 1962年，下村修和约翰森从维多利亚多管水母（Aequorea victorian）中分离生物发光蛋白质——水母素（aequorin）时，意外地得到了一个副产物。它在阳光下呈绿色，钨丝灯光下呈黄色，紫外光下呈亮绿色。之后，他们仔细研究了其发光特性，并发现：是水中的钙离子增强了水母素的发光。于1963年，他们在美国《科学》杂志上报道了钙离子和水母素发光的关系，并于1974年得到了这种蛋白质。 GFP在水母中之所以能发光，是因为水母素和GFP之间发生了能量转移。水母素在钙离子的刺激下发光，其能量可转移到GFP上，刺激GFP发光。这是物理化学中已知的荧光共振能量转移（FRET）在生物中的发现。 水母发光蛋白发出的蓝光通过能量转移激发GFP发出绿光， 水母发光蛋白 脱辅水母发光蛋白+氧化荧光素+蓝光 绿色荧光蛋白 绿光 下村修因此成为首位从水母中分离出GFP，并发现这种蛋白质在紫外光下呈亮绿色的科学家，他被誉为生物发光研究的第一人 马丁·沙尔菲 如果说下村修是绿色荧光蛋白的“接生婆”，沙尔菲则是绿色荧光蛋白的价值发现者。 马丁·沙尔菲等对实现GFP的基因表达做出了突出的贡献 他获奖的主要贡献在于向人们展示了绿色荧光蛋白作为发光的遗传标签的作用。 根据GFP的氨基酸序列，合成了相应的寡核苷酸片段，利用转基因技术，从反转录DNA(cDNA)文库中筛选出几个GFP的阳性克隆，再和质粒结合，选择合适的启动子，和所要研究的蛋白的基因结合，发现该基因在如大肠杆菌、线虫、酵母、果蝇、昆虫细胞等异源细胞内表达也能发出绿色荧光。 其后GFP作为活细胞分子探针，在基因表达调控、转基因动物研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化、病原菌侵入活细胞的分子过程等研究方面表现出极大的用途。 钱永健 钱永健在改造GFP方面取得了卓越的成就。1995年，他完成的单点突变（S65T）显著提高了GFP的光谱性质，起荧光强度和光稳定性也大大增强。 钱永健的主要贡献在于利用GFP来追踪追踪多种生物细胞进行的生物反应，他被认为是这方面的公认先驱。  GFP的特点 (1)它不仅本身稳定，不需要任何反应底物和辅助因子，且无种属限制，可在多种生物细胞中表达发出稳定荧光，不容易被猝灭 (2)分子量小，对细胞没有，与GFP融合的蛋白具有与GFP一样的荧光性质。 (3)使用方便，可对活细胞进行观察。用基因枪转化的受体细胞组织的瞬间表达或整株植物都可以用手提紫外灯观察。利用激光扫描共聚焦显微镜，甚至普通显微镜都可以观察到活细胞内蛋白的变化、活动。 (4)变异细胞可显著改变荧光特性。通过生物化学的方法将基因