临床PCR检验的室内质控2017版-李金明[学习].pptVIP

理想的PCR实验室设计A 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 扩增区 标本制备区 试剂准备区 * 精品PPT·可编辑借鉴 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 扩增区 标本制备区 试剂准备区 理想的PCR实验室设计B * 精品PPT·可编辑借鉴 临床PCR实验室设计的一般原则 各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作 “十六字口诀” * 精品PPT·可编辑借鉴 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 扩增区 标本制备区 试剂准备区 传递窗 传递窗 传递窗 * 精品PPT·可编辑借鉴 临床PCR实验室质量管理的特点 “无基因”概念 实验室要有严格的人员进入限制和程序 使用合格的试剂和消耗品 * 精品PPT·可编辑借鉴 PCR实验室“污染”的主要来源 临床标本中存在的大量待测微生物 科研中得到的质粒克隆 以前分析研究的特定微生物 大量存在于实验环境中的特定微生物 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的将造成假阳性的“污染”。 * 精品PPT·可编辑借鉴 PCR实验室的重要防“污染”措施 实验室的严格分区及工作程序的严格遵守 化学方法：实验台面可使用10％的次氯酸钠（漂白剂）清洗 ；有些物品比如放置扩增反应管的盘必须从污染区转回到清洁区时，在转回之前，应将其置于2％~10％的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。 紫外照射：实验台面、仪器设备、实验室空间 UNG * 精品PPT·可编辑借鉴 仪器设备及管理 PCR仪、离心机、加样器、恒温设备等应建立技术档案，并定期维护;PCR仪、加样器、恒温设备应定期进行校准 * 精品PPT·可编辑借鉴 理想的试剂:试剂的质检 核酸提取或标本处理方法的抗干扰能力（能否 有效地去掉PCR抑制物） 测定下限(Detection limit)（定性测定） 测定准确性和线性范围 批内变异和批间变异 试剂批间的一致性 有否污染 其他：外包装、试剂的完整性、有效期、说明书等 * 精品PPT·可编辑借鉴 理想的操作方法 按照试剂盒说明书操作即可吗? 操作中影响测定结果的关键环节 写出具有可操作性的SOP * 精品PPT·可编辑借鉴 人员培训 培训所涉及的范围:仪器设备使用、维护和校准；试剂、方法原理；质量管理体系；相关法律法规、相关领域的新技术、新理念和新进展；实验操作技能等。 如何培训：讲座、讨论、自学和参加培训班等。 培训的评估：书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等。 * 精品PPT·可编辑借鉴 统计质控方法 质控物浓度的选择 每次（批）测定质控物的数量及放置 质控规则 Levey-Jennings质控图方法 “即刻法”质控方法 “假阳性”的统计质控方法 * 精品PPT·可编辑借鉴 质控物浓度的选择 定量测定：测定线性范围内的高、中、低三种浓度 定性测定：接近方法测定下限的浓度 阴性质控物 * 精品PPT·可编辑借鉴 每次（批）测定质控物的数量及放置 标本数量如小于30，弱阳性和阴性质控各1份，标本数量增加，质控物数量相应按比例增加 均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取） 扩增时的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。 * 精品PPT·可编辑借鉴 阴性质控样本的种类 阴性原血清样本 实验过程中带入的空管 仅含扩增反应混合液的管 * 精品PPT·可编辑借鉴 阴性原血清样本的功能 监测实验室的以前扩增产物的“污染” 由实验操作所致的标本间的交叉污染。具体地说，如强阳性标本气溶胶经加样器所致的污染、强阳性标本经操作者的手所致的污染、使用翻盖离心管核酸提取时在较高温孵育时盖子崩开等 扩增反应试剂的污染。 * 精品PPT·可编辑借鉴 核酸提取过程中带入的空管 监测核酸提取过程中的实验室“污染”的存在（在整个实验过程中，开口放置于核酸提取的操作台面区域内，最后以水为基质，进行扩增 ） * 精品PPT·可编辑借鉴 仅含扩增反应混合液的管 监测试剂的“污染” * 精品PPT·可编辑借鉴 质控规则的表达方式及定义 质控规则的表达方式 质控规则的功能 常用质控规则的符号及定义 * 精品PPT·可编辑借鉴 质控规则的表达方式 通常质控规则以符号AL来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，L为控制限，通常用均值或均值±1～3SD来表示。 当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失控。 常用的13S