生物化学：生物化学实验一蛋⽩白质的性质 及定量测定.pdfVIP

⽣物化学实验⼀ 蛋⽩质的性质 及定量测定 第4周（10月13 日- 10 月16 日） 实验⽬的 加深理解所学有关的蛋⽩质性质的理论知识 掌握氨基酸和蛋⽩质常⽤的定性、定量分析的⽅法及原理 掌握微量移液器及紫外分光光度计的操作⽅法 掌握考马斯亮蓝染⾊⽐⾊法测定蛋⽩质含量的原理、⽅法 及操作 掌握标准曲线的制作⽅法及绘制注意事项 实验原理 蛋⽩质是由氨基酸组成的具有⼀定构象的⾼分⼦化合物 氨基酸的结构 肽键与肽键的结构 蛋⽩质的空间结构 结构决定性质 实验原理 氨基酸及蛋⽩质的性质 Optical activity 氨基酸鉴别的基础 UV absorption 定性、定量的基础 Acid-base properties 分离、纯化的基础 Isoelectric point 分离、纯化的基础 Chemical reaction 定性、定量及制备的基础 实验原理 蛋⽩质呈⾊反应 蛋⽩质所含的某些氨基酸及其 特殊结构，在⼀定条件下可与 某些试剂发⽣⽣成有⾊物质的 反应。 必要条件：有⾊物质——可见 或⾮可见光区的特征吸收峰发 ⽣变化 实验原理—蛋⽩质的呈⾊反应 蛋⽩质的定性⽅法主要是利⽤蛋⽩质（氨基酸）的 特征性基团发⽣的化学反应⽽进⾏的 实验名称 针对基团 双缩脲反应 肽键 茚三酮反应 α-氨基酸中的⼀级和⼆级胺 蛋⽩黄反应 芳⾹族氨基酸中的苯环 坂⼜反应 精氨酸中的胍基 实验原理 蛋⽩质沉淀反应 蛋⽩质溶解在⽔中，形成 的是胶体溶液。 ⾃由的⽔分⼦ （b u l k phase ）附着 (结合) 于蛋 ⽩质分⼦表⾯，形成⽔化 层 （hy dration lay er ）， 但外⼒影响⽔分⼦形成⽔ 化层时，蛋⽩质的溶解状 态即会发⽣改变。 实验原理 蛋⽩质沉淀反应 蛋⽩质溶解在⽔中，形成 的是胶体溶液。 ⾃由的⽔分⼦ （b u l k phase ）附着 (结合) 于蛋 ⽩质分⼦表⾯，形成⽔化 层 （hy dration lay er ）， 但外⼒影响⽔分⼦形成⽔ 化层时，蛋⽩质的溶解状 态即会发⽣改变。 实验原理 蛋⽩质是两性离⼦，能够发⽣两性解离，也有等电点。 等电点时蛋⽩质的溶解度、导电率、渗透压、粘 度均为最低。 实验原理 蛋⽩质的稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶性 盐类后，即从溶液中沉淀析出。 析出沉淀既是物理现象也有可能是化学反应的结果。 可逆沉淀 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷等状况，使蛋⽩质从胶 体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发⽣变化，在适当的条件下， 可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为⾮变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋⽩质的基本⽅法，如等电点沉淀法、盐 析法和有机溶剂沉淀法等。 实验原理 蛋⽩质的稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶性 盐类后，即从溶液中沉淀析出。 析出沉淀既是物理现象也有可能是化学反应的结果。 不可逆沉淀 在强烈条件下，不仅破坏了蛋⽩质胶体溶液的稳定性，⽽且也破 坏了蛋⽩质的结构和性质，产⽣的沉淀不能再重新溶解于⽔。 由于沉淀过程发⽣了蛋⽩质的结构和性质的变化，故称为变性沉 淀