APX_8704_PPA基因转化旱稻的后代鉴定及功能分析.pdfVIP

摘 要 摘 要 由于目前环境急剧恶劣，各种灾害频发，水稻产量达到瓶颈，因此对抗逆性水 稻品种的需求越来越强烈。旱稻作为水稻的变种，需水量小，抗逆性强，已越来越 受到人们的重视与利用，因此进行旱稻育种成为我国农业科研热点。 APX 8704 PPA 81 本课题以前期获得的转抗逆基因 、 和 的 个旱稻阳性株系为试 验材料，对其后代进行分子鉴定及功能分析。PCR分子鉴定得到54个候选纯合株系； 通过田间性状调查、复筛，筛选得到21个具有优良性状的候选纯合株系，分别为8 13 21 个矮杆株系和 个优良穗型株系。对这 个具有优良性状的候选纯合株系进行 Southern-Blot杂交试验，获得7个单拷贝株系。 对得到的7个单拷贝转基因株系进行Tail-PCR扩增，并对其产物进行测序分析， 6 APXH1 F-4 得到 个单拷贝转基因株系的插入位点结果。优良穗型材料转 株系 ，目 的基因APX 插入点为水稻基因组5号染色体碱基序列的758392bp处，插入位点在 Os05g0114000基因和Os05g0114100基因之间，Os05g0114000基因编码类PRLI相 互作用因子，Os05g0114100基因编码类核酸内切酶外切酶磷酸酶家族蛋白。优良/ / 穗型材料转PPAH2株系H-40、F-36、F-38，目的基因PPA插入点为水稻基因组4 号染色体碱基序p处，插入位点在Os04g0442000基因和Os04g0442100 Os04g0442000 2 ARF1 基因之间， 基因编码类生长素反应因子 （ 结合蛋白）， Os04g0442100基因编码Smr蛋白/MutS2C-端醛酸主蛋白。矮杆材料转PPAH2株系 H-54，目的基因PPA插入点为7号染色体碱基序列p处，该位点插入 到编码基因Os07g0604700 内部，该基因编码蛋白为B12D家族蛋白，其上游编码基 因Os07g0604600编码类B12D蛋白，下游编码基因Os07g0604800编码类α-1,4-葡聚 糖-蛋白合成酶。矮杆材料转PPAH2株系H-55，目的基因PPA插入点为4号染色体 碱基序列p处，插入位点在Os04g0578400基因和Os04g0578500基因 之间，Os04g0578400基因编码类β-环羟化酶，Os04g0578500基因是一个预测基因。 插入位点的确定，证明外源基因已成功整合到旱稻基因组中；插入位点及其上、下 游基因的确定为后期研究整合到旱稻基因组中外源片段的作用机制，以及转基因株 系的开发利用奠定了基础。 关键词 旱稻；转基因；优良性状；单拷贝株系；Tail-PCR I Abstract Abstract Duetothesevereenvironment,frequentdisastersandthebottleneckofriceyield,the demandforstress-resistantricevarietiesisincreasing.Asavarietyofrice,uplandricehas been paid more and more attention and utilized because of its small water demand and strongstressresistance.Therefore,optimizingthequality