基于AuxIAA家族转基因水稻维管束鞘细胞淀粉积累株的筛选与鉴定.pdfVIP

摘 要 水稻作为典型 C3 作物，其光合作用效率及产量比玉米等 C4 植物低。利用基因 工程技术将 C4 型光合作用导入水稻，将为提高水稻的实际产量和生产潜力提供可 能性。植物转录因子（TFs ）作为基因表达的关键调节因子，对于调控基因表达至 关重要。本研究采用农杆菌介导的遗传转化法将玉米中 26 个 Aux/IAA 家族转录因子 基因转化到“日本晴”水稻，对转基因植株进行维管束鞘细胞淀粉累积株系的筛选 与鉴定，为其水稻光合作用及其产物运输机制的研究，提供材料和技术支撑。主要 研究结果如下： 1. 利用 Gateway 克隆技术构建了 26 个玉米 Aux/IAA 基因家族转录因子基因的过 表达载体。 2. 通过农杆菌介导的水稻转化试验将表达载体上的目的基因导入“ 日本晴”水 稻，愈伤诱导率约为 94.66% ，分化率约为 84.56%；对 T0 代株系进行目的基因检 测，阳性率为 100%。 3. 所得转基因苗取分蘖期叶片切片后，经碘-碘化钾(I -KI)染色，获得维管束鞘 2 细胞淀粉积累的株系共计 2 个，分别为 aux3 、aux8 。 4. 农艺性状调查结果表明，与野生型相比，aux3 株系株高、千粒重、结实率均 显著降低；aux8 株系农艺性状数据与野生型无显著差异。 5. 光合测定结果表明，与野生型相比，aux3 株系净光合速率显著降低，aux8 株 系蒸腾速率和气孔导度显著升高。 6. 淀粉含量分析表明，分蘖期转基因株系叶片中淀粉含量均显著高于野生型。 7. 转基因株系淀粉代谢相关基因较野生型呈现出差异性表达。两个转基因株系 中淀粉合成的关键限速酶基因 AGPL1 均表现高表达，这有利于叶片内 ADP-葡萄糖 的合成；在 aux3 株系中，蔗糖转运蛋白（SUTs ）关键基因 SUT4 表达显著降低， 推测可能蔗糖运输受阻。在 aux8 株系中，淀粉合成酶（SS）关键基因 GBSS Ⅱ表达 量增高，推测可能淀粉合成增多，分解和运输不及时，造成淀粉积累。 关键词：水稻；转录因子；Aux/IAA 基因家族；淀粉；维管束鞘细胞 I II Abstract Rice, as a typical C crops, has lower photosynthetic efficiency and yield than that of 3 C , such as corn. Using genetic engineering technology to introduce C photosynthesis 4 4 into rice will provide the possibility for improving the actual yield and productive potential of rice. Transcription factor (TFs), as a key regulator of gene expression, is essential for regulating downstream gene expression. In this study, by agrobacterium infection, we have transferred 26 genes of Aux/IAA transcription factor family derived from corn into Nipponbare. Transgenic plants with starch