荧光pcr定量质量控制及防污染措施.pdfVIP

解放军第三 0 二医院 王海滨 写在课前的话 近几年在临床检测病毒核酸和细菌核酸上，荧光定量 PCR 技术越来越广泛。但是如何进行治疗控制以及出现污染 后怎样进行清除污染？本文主要讲述怎样来防止污染的产生。 一、荧光 PCR 定量的概述 （一）荧光 PCR 定量的原理 实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后 通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 常规的 PCR 也就是电泳 PCR，它是合成一个正向引物和反向引物为目的 模板，即 DNA 或 RNA 作为一个模板扩增，扩增后通过跑电泳的方式来检测它存在与否，是相对量的变化。由于跑电泳经 常导致产物外泄，因此污染的几率比较高。 近几年 PCR 扩增时在参入一对引物的同时参入单个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记单个 报告荧光基团和单个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时， Taq 酶的 5 端～3端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即