浙科版高中生物选修3疑难点的探讨.pptVIP

选修3疑难点探讨 瑞安中学林娜  第一部分:基因工程 易混概念 十基因探针基因诊断基因敲除 【基因探针】:即核酸探针,是一段带有检测 标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸 序列NA或RNA)。根据杂交原理,作为探针的 核酸序列至少必须具备以下两个条件: ①应是单链,若为双链,必须先行变性处理 ②应带有容易被检测的标记。  第一部分:基因工程 易混概念 十基因探针基因诊断基因敲除 【基因诊断】:又称DNA诊断或分子诊断,通过 分子生物学和分子遗传学的技术,直接检测出 分子结构水平和表达水平是否异常,从而对疾 病做出判断。进行基因检测有两个必要条件, 是必需的特异的DNA探针;二是必需的基因组 DNA。  第一部分:基因工程 易混概念 十基因探针基因诊断基因敲除 【基因敲除】:是自80年代末以来发展起来的 一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径 使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意 义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理, 用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到 基因敲除的目的。  第一部分:基因工程 易混概念 基因探针基因诊断基因敲除 十DNA分子杂交技术抗原抗体杂交技术 【DNA分子杂交技术】:互补的核苷酸序列通过 Wal ick碱基配对形成稳定的杂合双链分 子DN分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特 异性的可以根据所使用的探针已知序列进行特 异性的靶序列检测。  第一部分:基因工程 易混概念 基因探针基因诊断基因敲除 十DNA分子杂交技术抗原抗体杂交技术 【抗原抗体杂交技术】: Western杂交—蛋 白质分子(抗原一抗体)之间的杂交。它是检 测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。  第一部分:基因工程 二、疑难问题 限制性核酸内切酶能识别RN序列吗? 限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA 分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。P2  第一部分:基因工程 疑难问题 不同限制酶处理获得的不同黏性末端也可形 成重组DNA分子吗? 限制酶产生的末端的连接有三种情况 ①匹配末端。用同一种酶酶切产生的带相同突出端的两个片段; 用不同的酶酶切但带有相同突出端的两个片段,如用 BamH I及 B酶切相同的突出端都可以匹配,并在连接酶作用下连接。 ②平末端。平末端可以直接连接,但连接效率比黏性末端低。 ③不匹配黏端。不配对黏端的连接可采用两种方法:A.用S1酶 切除突出的核苷酸,将黏端修平,再用连接酶连接。B.用 Klenow酶将黏端部分补平,如HndⅢ与XbaI产生的黏端不能 匹配,可分别用两种核苷酸填补,使之产生匹配黏端,再用连 接酶连接,该法的优点在于可防止片段的自身连接。  Hi卫aIII b TTCGAA CTCr一 Hind III Xha I 5’-A CTAGA-3 3’- TTCGA 酶 Klenow酶 dATP dTTP dGTP AG 3’- TtCGA TCT-5 5’- AAGCTAGA-3 3-TTCGATCT-5  第一部分:基因工程 疑难问题 Ti质粒是什么?P9 T质粒是在根瘤土壤农杆菌细胞中存在的一种染色体外自 主复制的环形双链DNA分子。它控制根瘤的形成,可作 为基因工程的载体。此质粒既有在细菌中表达的基因,又 有在高等植物中表达的基因,这是很独特的自的图 的染色体DNA 农杆菌转化法 导A植物细胞 堵香再生成植蛛 构建表达载体 人农杆菌 i质 →O 含目的基因的含重组T质粒的农杆菌 植物细图 EDNA 基因的DA重组质粒 表现出新性状的植株