细胞免疫荧光染色实验.docVIP

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2020-11-05 发布于浙江
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细胞免疫荧光染色实验.doc

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细胞免疫荧光染色实验实验前一天将细胞接入铺有盖玻片的六孔板内（盖玻片预先用酒精浸泡30分钟左右，使用之前用酒精灯灭菌几秒钟，然后用镊子夹住盖玻片放入六孔板内）；第二天，待细胞融合至70%左右开始进行染色；弃去旧培养基，每孔加入1-2mlPBS，漂洗3min/次*3次；吸出PBS，每孔加入预冷的4%多聚甲醛1ml，室温下固定细胞20min；吸出4%多聚甲醛，每孔加入1-2mlPBS，漂洗5min/次*3次；吸出PBS，每孔加入0.5%TritonX-100 1ml，室温下孵育10min（0.5%TritonX-100用PBS稀释）；吸出0.5%TritonX-100，每孔加入1-2mlPBS，漂洗5min/次*3次；吸出PBS，每孔加入1ml 2%BSA（PBS稀释），室温下封闭30min-1h；吸出2%BSA，勿洗；每个盖玻片上滴加50ul左右一抗（一抗稀释比例根据说明书，用2%BSA稀释），置于4度过夜；次日取出六孔板，每孔加入1-2mlPBS，漂洗5min/次*3次；吸出PBS，每个盖玻片上加入50ul左右荧光二抗（二抗稀释比例根据说明书，用2%BSA稀释），室温下孵育1小时（我一般都是4度孵育过夜）；每孔加入2mlPBS，漂洗5min/次*3次；吸出PBS，每孔加入染核试剂（DAPI或Hoechst），按照说明书操作；吸出染核试剂，用PBS漂洗3次；加入10-20ul封片剂封片；荧光显微镜下观察拍照（封片好的细胞样品可于4度存放2周以上甚至一年）。