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含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用 标本：体液 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书 试验原理： BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验( ELISA).已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子 ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物， 然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 BFGF的浓度呈比例关 系。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书 自备材料 蒸偕水。 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1 .避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书操作注意事项 1 .试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触, 有毒。实验完成后应立即读取 OD值 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法 1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后， 1000 漓g 心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 顽、30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液---1000 离，IX10分钟去除颗粒和聚合物。 4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70 C保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使 用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37C或更高的温度加热解 冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。 2 .洗涤缓冲液（50 /的稀释：蒸偕水50倍稀释。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书操作步骤 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生 加样上的误差。 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个 样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素 标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37C温育1小时。 4 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3次。 如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5、 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀，37C温育30分钟。 6 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3次。 如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37C温育10分钟。避免光照。 取出酶标板，迅速加入 50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9 .在450nm波长处测定各孔的 OD值。 局限 6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书性能 灵敏度：最小的检测浓度小于 1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为0.990。 特异性：不与其它细胞因子反应。 重复性：板内、板间变异系数均小于 10%。 含碱性螺旋环螺旋域蛋白 B8ELISA试剂盒说明书结果判断与分析 1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的 OD值 2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的BFGF标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线， 样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 3、检测值范围: 0-800pg/ml