细胞色素氧化酶P450介导的昆虫抗药性研究进展.docVIP

细胞色素氧化酶P450介导的昆虫抗药性研究进展 作者：祁欣 ? 【摘要】细胞色素氧化酶P450介导的昆虫抗药性研究有利于延缓或防止昆虫被杀虫剂的抗药性，延长杀虫剂的使用寿命。本文简要介绍了昆虫细胞色素氧化酶Ｐ450的研究情况，以及昆虫抗药性与细胞色素氧化酶Ｐ450的关系，对细胞色素Ｐ450介导抗性的分子基础进行了介绍。 【关键词】细胞色素氧化酶Ｐ450；抗药性；昆虫 ? ? ? 在生物有机体中，有一种非常重要的酶系就是细胞色素Ｐ450单加氧酶系，其在生物学领域非常重要，能够对多种外源性物质和内源性物质进行代谢。由于长期使用化学杀虫剂不仅容易造成严重的环境污染，影响人类的健康，而且容易造成昆虫的抗药性，造成一系列的环境问题。昆虫对以拟除虫菊酯类杀虫剂为代表的杀虫剂产生抗药性的主要原因在于昆虫增强了Ｐ450单加氧酶系。因此细胞色素氧化酶P450介导的昆虫抗药性研究成为了生物技术领域中一个重要的研究方向。 ? 1.昆虫细胞色素氧化酶Ｐ450 1.1多样性的分布 ? ? 在几乎所有的生物中都存在细胞色素P450，其能够代谢除草剂、杀虫剂、芳香烃、脂肪烃、甾类化合物、脂肪酸等化合物。人类首次确定细胞色素氧化酶P450的存在是在1967年，随后发现了几十种具有P450分布的昆虫。昆虫的入口组织是昆虫P450主要分布的区域，其随外源性化合物进入虫体，包括马氏管、脂肪体、中肠。不同昆虫的各个部位的P450含量有所差异。 1.2多样性的种类 ? ? 当前已经鉴定出的昆虫细胞色素P40基因就有200多个，分属不同的基因家族。同时同种生物中也存在多种P450基因，例如果蝇的基因组中的P450基因就多达90个。而且在基因组学技术的发展过程中，来越多的P450基因被发现。 1.3多样性的功能 ? ? P450具有广泛地底物特异性，功能非常多样，其主要有两方面的功能。第一，解毒和活化外源性物质，例如诱变剂前提、植物次生物质和杀虫剂。第二，对催化内源性物质进行降解和合成。大多数观众产生抗药性的主要机制就是细胞色素氧化酶P450对杀虫剂产生的代谢作用增强[1]。 ? 2.细胞色素氧化酶P450与昆虫抗药性的关系 2.1 昆虫抗药性与ＣＹＰ6家族 ? ? 世界上第一个昆虫Ｐ450基因ＣＹＰ6Ａ1是1989年通过抗血清筛选的方式得到的。近年来，对昆虫的抗药性与P450的关系的研究范围正在不断扩大。ＣＹＰ6Ｄ1是当前研究最为深入的Ｐ450基因。在家蝇的抗性品种的胸神经节中广泛的存在Ｐ450ＬＰＲ蛋白，其表达水平远高于敏感品系，与家蝇的抗药性有着直接的关系。通过对抗性品种的ＣＹＰ6Ｄ1ｍＲＮＡ进行测试发现，其表达水平远高于敏感品系，这也说明ＣＹＰ6Ｄ1应该为ＰＲ的编码基因。该项研究的意义在于：某一种P450的作用产生了抗性，因此要有效消除抗性就可以使用该P450的特异性抑制剂。P450的进攻部位仅为杀虫剂分子中的某一个特定的结构，因此要有效地杀死害虫就要使用于该结构有所区别的同类杀虫剂。细胞色素B5的参与P450的催化作用这之间的关系，可以将其作为一个抗性治理的靶标。 ? ? 通过对北京地区家蝇的溴氰菊酯的抗性进行研究也可以发现，钠离子通道和ＣＹＰ6Ｄ1的联合作用导致抗性的主要原因。其他研究也说明ＣＹＰ6ＢＧ1、ＣＹＰ6ＢＧ2都会导致昆虫产生抗性[2]。 2.2昆虫抗药性与其他P450家族 ? ? 并非所有的P450基因都会产生抗药性。昆虫的杀虫剂抗性品系的过量表达与ＣＹＰ4基因有着直接的关系。根据一系列的相关实验可以发现，当前Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交是对昆虫抗性与P450是否有关系的常见检测方法。而使用特异性抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交的检测方法更加准确。 ? ? 要评价P450是否与昆虫的抗药性有关，取决于批450蛋白是否能够对产生抗性的外源物质进行代谢，以及生物体内这种P450蛋白的含量。 ? 3.细胞色素氧化酶P450介导的昆虫抗药性分子基础 3.1过量表达的P450 ? ? 抗性品种中蛋白质或Ｐ450ｍＲＮＡ的增加是昆虫细胞色素P450，参与杀虫剂抗性的主要表现其会增加细胞色素，增加氧酶解毒的作用。ＣＹＰ6Ｇ1的过量表达与抗性有着直接的关系，通过转基因实验可以发现，Ｐ450介导ＤＤＴ抗性的充分和必须条件就是ＣＹＰ6Ｇ1的过量表达。 3.2改变氨基酸的序列 ? ? 根据研究表明，氨基酸序列中个别氨基酸的替换会影响抗性。而迄今为止还没有发现充分的证据来证明这一观点。研究中对果蝇不同抗性水平3个品系的ＣＹＰ6Ａ2序列进行了比较，认为存在替换的氨基酸有3个，其突变会对ＣＹＰ6Ａ2活性位点的结构产生影响。 3.3氨基酸序列的改变和，P450过量表达的联合作用 ? ? 研究者通过克隆敏感品系和拟除虫菊酯抗性的细线椿象Ｌｙｇｕｓｌｉｎｅｏｌａｒｉ，得到了还有氨基酸和开放阅读框