平面色谱法山西医科大学.docx

实用文案 第十九章 平面色谱法 平面 色谱 法 （ plane chromatography ）是 组 分 在以 平 面 为 载体 的 固定相和流动相之间吸附或分配平衡而进行的一种色谱方法。该法具有操作简单，不需要昂贵的仪器设备，分析速度快，结果直观，并有较 高 的 分 离 能 力 。 平 面 色 谱 法 主 要 包 括 薄 层 色 谱 法 （ thin layer chromatography ； TLC）和 纸 色 谱 法（ paper chromatograph ）。纸 色 谱法出现于 20 世纪的 40 年代，主要用于微量分析，特别在生化和医药分析中的应用十分广泛。但色谱纸的机械强度较差，传质阻力大，使该法的应用和推广受到了限制。20 世纪 60 年代，薄层色谱法的发展和普及，使得纸色谱法的应用逐渐减少。20 世纪 80 年代出现了仪器 化薄 层色 谱法 （ instrumental thin layer chromatography ）， 薄 层 色 谱的每一步骤均由仪器来代替以往的手工操作，再配以薄层扫描仪，这样就使在较长时期内被认为只能用来定性和半定量的薄层色谱法定量结果的重现性和准确度大大提高，成为一种有价值的分离分析方法。 第一节 平面色谱法的分类和原理 一、 平面色谱法的分类 平面色谱法按操作方式可分为： 1．薄层色谱法 薄层色谱法是把固定相均匀地涂布在玻璃板、塑料板或铝箔上形成厚薄均匀的薄层，在此薄层上进行混合组分分离的色谱法。按照薄层色谱法的分离机制不同，薄层色谱法又可分为吸附薄层色谱法、分配薄层色谱法和分子排阻薄层色谱法。 2．纸色谱法 纸色谱法的固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为与水互不相溶的有机溶剂，根据被分离混合组分在水和有机溶剂中的溶解能力不同，在色谱纸上产生差速迁移而得到分离的方法。纸色谱分离原理属于分配色谱的范畴。 标准文档 实用文案 3．薄层电泳法 薄层电泳法是带电荷的被分离物质（蛋白质、核苷酸、多肽、糖类等）在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持体上，以不同速度向其电荷相反的电极方向泳动，产生差速迁移而得到分离的方法。薄层电泳法属于平面色谱范围，但由于电泳与色谱的驱动力、仪器设备及测定对象与薄层色谱法及纸色谱法有较大差别，故本章不予介绍。 二、 平面色谱法参数 平面色谱与柱色谱的基本原理相同，但操作方法不同，故各种参数也不完全相同。以下主要介绍平面色谱法的定性参数、相平衡参数、面效参数和分离参数。 （一）定性参数 薄层色谱的定性参数是色谱过程热力学特性参数，包括比移值与相对比移值。 1． 比 移值 （ retardation factor ； Rf ） 比移 值 是 在 一定 条 件 下，溶质移动距离与流动相移动距离之比。是平面色谱法中用来表征平面色谱图上斑点位置的基本参数，也是平面色谱法用于定性的基本参数。 L （ 19-1 ） Rf L0 式中 L 为原 点（ origin ）至斑点中心的距离，L0 为原点至溶剂前 沿（ solvent front ）的 距 离（ 见图 19-1 ）。 当 Rf =0 时，组分不随流 动相 展开 ，停 留 在原 点 ， 表示 组 分 在固 定 相上 完 全 保留 ； 当 Rf =1 时 ，组分随流动相展开至溶剂前沿，表示组分在固定相上完全不保留。所以 Rf 值 在 0~1 之 间 。 在 实际 工作 中， Rf 值 适 宜 范围 是 0.2~0.8 ， 最佳范围 是 0.3~0.5 。 图 19-1 平面色谱示意图 由于 Rf 受 被 分离 组 分的 结构 和 性 质，固 定 相和 流动 相的 种 类和 性 标准文档 实用文案 质，展开室内的饱和度、温度等多因素的影响。在不同实验室或不同 实验 者间 进行 同 一化 合 物 Rf 值的 比较 是 很 困难 的 。 2． 相 对比 移值 （ relative retardation factor ； Rr ） 相 对比 移值是在一定条件下，被测组分的比移值与参考物质比移值之比。 Rr Rf (i) L(i) （ 19-2 ） Rf (s) L(s) 式中 Rf ( i ) 和 Rf ( s ) 分 别 为 组分 i 和 参 考物 质 s 在相 同 条 件 下 的 比 移值 。L( i ) 和 L( s ) 分 别 为组 分 i 和 参考 物 质 s 在 平面 色 谱 上 的移 动 距 离。 相对比移值在一定程度上消除了测定中的系统误差，因此与比移值相 比具 有较 高 的重 现 性 和可 比 性 。测 定 Rr 时 ，可 以选 择 纯 物 质加 到试样 中作 为参 考 物质 ， 也 可以 是 试 样中 的 某一 已 知 组分 。 Rr 可 以 大 于 1 ，也 可以 小于